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lors de l’étape précédente, incluent deux souches sélectionnées pour chaque site de
prélèvement.
Les tubes contenant différentes concentrations de métaux ont été inoculés avec 1 ml des
tubes inoculés. Chaque espèce bactérienne a été introduite dans chacun des cinq niveaux
de concentration de chaque métal utilisé. Les cultures ont été incubées à 30 °C pendant
72 heures.
Durant la préparation des milieux de culture, des blancs analytiques pour chaque
concentration ont été effectuées qui vont servir à la lecture des résultats. Ainsi une autre
série de 6 tubes à essai ne contenant que le milieu MH sans les métaux a été considérée
comme témoins positifs de la croissance bactérienne A0.
II.4.3 Observation de la croissance bactérienne par spectrophotométrie
L’observation des résultats de la croissance bactérienne a été faite par la mesure de la
densité optique (DO) des cultures à une longueur d’ondes de 600 nm à l’aide d’un
spectrophotomètre.
Le spectrophotomètre fonctionnant dans le domaine ultraviolet-visible (UV-Vis)
utilisent une source lumineuse dans la longueur d’onde se situe dans la gamme dans la
gamme de l’UV ou du visible (généralement de 190 un 900 nanomètres) pour éclairer un
échantillon. Les instruments mesurent ensuite la lumière absorber transmise ou
réfléchie par l’échantillon à chaque longueur d’onde
La mesure de la turbidité (trouble en suspension en densité optique) par
spectrophotométrie à UV (quantité de lumière qui peut traverser un échantillon) est une
des différentes techniques existantes de dénombrement (Benaissa, 2022).
Mode opératoire :
- Préparer les cuves de mesure propre pour échantillon liquide du
spectrophotomètre, Il convient de conserver des fenêtres optiques aussi propres
que possible et de ne jamais les toucher.
- Récupérer les tubes précédant contenant l’inoculum en présences des métaux,
ainsi que les blancs analytiques pour chaque concentration de métal donné.
- Allumer l’appareil et attendre qu’il se calibre, généralement ceci prend quelque
minute. Sélectionner la longueur d’onde qui est de 620 nm (Bury-Moné , 2007)
- Agiter chaque tube avant de le verser dans une cuve et de lire son absorbance
pour qu’il soit homogène.
- Remplir les cuves avec les milieux. Les cuves doivent être remplies jusqu’à un
niveau approprié généralement environ ¾. Le milieu ne doit pas toucher les
bords de la cuve.
- Placer une cuve contenant le blanc qui convient a une concentration donné d’un
métal donné dans le spectrophotomètre. Cette étape sert à calibrer l’appareil.
lors de l’étape précédente, incluent deux souches sélectionnées pour chaque site de
prélèvement.
Les tubes contenant différentes concentrations de métaux ont été inoculés avec 1 ml des
tubes inoculés. Chaque espèce bactérienne a été introduite dans chacun des cinq niveaux
de concentration de chaque métal utilisé. Les cultures ont été incubées à 30 °C pendant
72 heures.
Durant la préparation des milieux de culture, des blancs analytiques pour chaque
concentration ont été effectuées qui vont servir à la lecture des résultats. Ainsi une autre
série de 6 tubes à essai ne contenant que le milieu MH sans les métaux a été considérée
comme témoins positifs de la croissance bactérienne A0.
II.4.3 Observation de la croissance bactérienne par spectrophotométrie
L’observation des résultats de la croissance bactérienne a été faite par la mesure de la
densité optique (DO) des cultures à une longueur d’ondes de 600 nm à l’aide d’un
spectrophotomètre.
Le spectrophotomètre fonctionnant dans le domaine ultraviolet-visible (UV-Vis)
utilisent une source lumineuse dans la longueur d’onde se situe dans la gamme dans la
gamme de l’UV ou du visible (généralement de 190 un 900 nanomètres) pour éclairer un
échantillon. Les instruments mesurent ensuite la lumière absorber transmise ou
réfléchie par l’échantillon à chaque longueur d’onde
La mesure de la turbidité (trouble en suspension en densité optique) par
spectrophotométrie à UV (quantité de lumière qui peut traverser un échantillon) est une
des différentes techniques existantes de dénombrement (Benaissa, 2022).
Mode opératoire :
- Préparer les cuves de mesure propre pour échantillon liquide du
spectrophotomètre, Il convient de conserver des fenêtres optiques aussi propres
que possible et de ne jamais les toucher.
- Récupérer les tubes précédant contenant l’inoculum en présences des métaux,
ainsi que les blancs analytiques pour chaque concentration de métal donné.
- Allumer l’appareil et attendre qu’il se calibre, généralement ceci prend quelque
minute. Sélectionner la longueur d’onde qui est de 620 nm (Bury-Moné , 2007)
- Agiter chaque tube avant de le verser dans une cuve et de lire son absorbance
pour qu’il soit homogène.
- Remplir les cuves avec les milieux. Les cuves doivent être remplies jusqu’à un
niveau approprié généralement environ ¾. Le milieu ne doit pas toucher les
bords de la cuve.
- Placer une cuve contenant le blanc qui convient a une concentration donné d’un
métal donné dans le spectrophotomètre. Cette étape sert à calibrer l’appareil.