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différentiel de la coloration de Gram ; les bactéries Gram-positives gardent le
violet de gentiane, tandis que les bactéries Gram-négatives le perdent et se
décolorent
- La coloration différentielle où le frottis est coloré à la fuchsine pendant 1
minute. Cette étape colore les bactéries Gram-négatives en rose pendant que les
bactéries Gram-positives sont colorées en violet foncé.
- L’observation où la lame est examinée au microscope en utilisant les objectifs
(x40, x100). Les bactéries Gram négatif apparaissent en rose rouge. Elles sont
décolorées par l’alcool et teintées par la fuchsine diluée.
La détermination des caractères physiologiques
L’étude des caractères physiologiques consiste à examiner et à analyser les fonctions
biologiques et les activités métaboliques des organismes vivants, à l’aide de plusieurs
tests.
- Le test de la catalase permet de détecter la présence de l'enzyme catalase dans
une souche bactérienne en catalysant la décomposition du peroxyde d’hydrogène
en eau et en oxygène (Guiraud et al, 1998). Une goutte de peroxyde (eau
oxygénée) est placée sur une lame de microscope. Avec l’anse a platine stérilisé,
un prélèvement de la colonie bactérienne purifié est déposé sur la goutte de
peroxyde. Un dégagement gazeux abondant sous forme de mousse ou de bulles
traduit la décomposition de l’eau oxygénée sous l’action de la catalase.
- Le test de l’oxydase permet d’identifier un type spécifique de chaîne
respiratoire chez les bactéries, qui peut oxyder des composés chimiques tels que
le réactif d'oxydase de Kovacs, produisant une couleur violette intense. Le disque
d’oxydase est déposé stérilement au centre d’une lame propre (Benaissa 2022).
Un fragment de colonie bactérienne (culture fraiche) est prélevé, ensuite recueilli
sur la surface de la gélose avec l’anse a platine et étalé sur le disque. En lecture,
les espèces oxydase-positives donnent une coloration violette immédiatement ou
dans les 10 secondes.
La détermination des caractères biochimiques
L’importance des tests métaboliques réside dans le fait qu’ils permettent de distinguer
des bactéries très apparentées par la recherche de certains indices tels que la présence
de certaines enzymes, la dégradation de l’urée et l’esculine, la transformation du lactose
et la production de gaz, l’utilisation du citrate, la production d’acétone ainsi que
l’utilisation de différents sucres comme source de carbone.
Le principe a été miniaturisé dans des galeries spécialisées API (Appareils et Procédés
d'Identification). Pour les entérobactéries, API 20 E est habituellement utilisée avec une
série de 20 tests pour mettre en évidence les caractères biochimiques des bactéries a
différentiel de la coloration de Gram ; les bactéries Gram-positives gardent le
violet de gentiane, tandis que les bactéries Gram-négatives le perdent et se
décolorent
- La coloration différentielle où le frottis est coloré à la fuchsine pendant 1
minute. Cette étape colore les bactéries Gram-négatives en rose pendant que les
bactéries Gram-positives sont colorées en violet foncé.
- L’observation où la lame est examinée au microscope en utilisant les objectifs
(x40, x100). Les bactéries Gram négatif apparaissent en rose rouge. Elles sont
décolorées par l’alcool et teintées par la fuchsine diluée.
La détermination des caractères physiologiques
L’étude des caractères physiologiques consiste à examiner et à analyser les fonctions
biologiques et les activités métaboliques des organismes vivants, à l’aide de plusieurs
tests.
- Le test de la catalase permet de détecter la présence de l'enzyme catalase dans
une souche bactérienne en catalysant la décomposition du peroxyde d’hydrogène
en eau et en oxygène (Guiraud et al, 1998). Une goutte de peroxyde (eau
oxygénée) est placée sur une lame de microscope. Avec l’anse a platine stérilisé,
un prélèvement de la colonie bactérienne purifié est déposé sur la goutte de
peroxyde. Un dégagement gazeux abondant sous forme de mousse ou de bulles
traduit la décomposition de l’eau oxygénée sous l’action de la catalase.
- Le test de l’oxydase permet d’identifier un type spécifique de chaîne
respiratoire chez les bactéries, qui peut oxyder des composés chimiques tels que
le réactif d'oxydase de Kovacs, produisant une couleur violette intense. Le disque
d’oxydase est déposé stérilement au centre d’une lame propre (Benaissa 2022).
Un fragment de colonie bactérienne (culture fraiche) est prélevé, ensuite recueilli
sur la surface de la gélose avec l’anse a platine et étalé sur le disque. En lecture,
les espèces oxydase-positives donnent une coloration violette immédiatement ou
dans les 10 secondes.
La détermination des caractères biochimiques
L’importance des tests métaboliques réside dans le fait qu’ils permettent de distinguer
des bactéries très apparentées par la recherche de certains indices tels que la présence
de certaines enzymes, la dégradation de l’urée et l’esculine, la transformation du lactose
et la production de gaz, l’utilisation du citrate, la production d’acétone ainsi que
l’utilisation de différents sucres comme source de carbone.
Le principe a été miniaturisé dans des galeries spécialisées API (Appareils et Procédés
d'Identification). Pour les entérobactéries, API 20 E est habituellement utilisée avec une
série de 20 tests pour mettre en évidence les caractères biochimiques des bactéries a