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déchiquetées pouvant même présenter parfois des prolongements. Certaines
colonies peuvent envahir le milieu de culture de manière diffuse.
- La forme du relief qui donne l’apparence de colonies plates, bombées ou demibombées avec le centre de la colonie pouvant être surélevé ou ombiliqué.
- La transparence qui influence l’aspect général d’où l’existence des colonies
transparentes, translucides, lactescentes ou opaques.
- L’aspect de la surface qui induit des colonies lisses, rugueuses ou muqueuses.
- La pigmentation, même si de nombreuses colonies n'ont pas une couleur
distincte et apparaissent blanches ou grises, certaines bactéries produisent des
pigments insolubles, donnant à leurs colonies des couleurs spécifiques comme le
rose, le jaune ou le rouge. D'autres bactéries produisent des pigments solubles
qui se diffusent et colorent le milieu de culture (Benaissa .2020).
L’observation microscopique des préparations bactériennes permet de faire une étude
morphologique des cellules bactériennes. Dans ce travail, l’observation à l’état frais et la
Coloration de Gram ont été utilisés pour l’étude morphologique des cellules
bactériennes.
➢ L’observation à l'état frais : cet examen microscopique sur des bactéries vivantes
est réalisé entre lame et lamelle, il permet de déterminer la forme, le mode de
groupement et leur mobilité si visible. Les bactéries sont considérées mobiles,
lorsque des trajectoires très différentes sont observées par des déplacements dans
toutes les directions (Benaissa 2022). Une goutte d’eau distillée stérile est déposée
au centre de la lame, puis déposer une lamelle au-dessus en évitant de créer des
bulles d’air. On observe au microscope optique à l’objectif GX40.
➢ La coloration de Gram : développée en 1884 par le médecin danois Christian Gram,
cette méthode de coloration est la plus largement utilisée en bactériologie. C’est une
coloration différentielle qui permet de Classer les bactéries en 2 catégories les
bactéries Gram + et les bactéries Gram- . La coloration de Gram permet de détecter la
morphologie bactérienne et d’observer le mode de regroupement. Le mode
opératoire a été suivi selon ces étapes (Willey, Sherwood et all, 2011):
- La préparation du frottis où les bactéries sont étalées sur une lame propre et
en laissant sécher et fixer physiquement l'étalement.
- La coloration où le violet de gentiane est appliquée sur le frottis pendant 1
minute, ensuite le colorant est rincé. Le but de cette étape est d’obtenir une
coloration primaire.
- La fixation où le lugol est appliqué pendant 1minute pour fixer le frottis, ce
colorant agit comme un mordant en augmentant les interactions avec la cellule
pour qu’elle soit plus fortement contrastée. Ensuite le frottis est rincée pour le
débarrasser du colorant.
- La décoloration où le frottis est décoloré avec un mélange d'alcool et d'acétone
pendant 15 secondes. Ensuite le frottis est rincé. Cette étape engendre l’aspect
déchiquetées pouvant même présenter parfois des prolongements. Certaines
colonies peuvent envahir le milieu de culture de manière diffuse.
- La forme du relief qui donne l’apparence de colonies plates, bombées ou demibombées avec le centre de la colonie pouvant être surélevé ou ombiliqué.
- La transparence qui influence l’aspect général d’où l’existence des colonies
transparentes, translucides, lactescentes ou opaques.
- L’aspect de la surface qui induit des colonies lisses, rugueuses ou muqueuses.
- La pigmentation, même si de nombreuses colonies n'ont pas une couleur
distincte et apparaissent blanches ou grises, certaines bactéries produisent des
pigments insolubles, donnant à leurs colonies des couleurs spécifiques comme le
rose, le jaune ou le rouge. D'autres bactéries produisent des pigments solubles
qui se diffusent et colorent le milieu de culture (Benaissa .2020).
L’observation microscopique des préparations bactériennes permet de faire une étude
morphologique des cellules bactériennes. Dans ce travail, l’observation à l’état frais et la
Coloration de Gram ont été utilisés pour l’étude morphologique des cellules
bactériennes.
➢ L’observation à l'état frais : cet examen microscopique sur des bactéries vivantes
est réalisé entre lame et lamelle, il permet de déterminer la forme, le mode de
groupement et leur mobilité si visible. Les bactéries sont considérées mobiles,
lorsque des trajectoires très différentes sont observées par des déplacements dans
toutes les directions (Benaissa 2022). Une goutte d’eau distillée stérile est déposée
au centre de la lame, puis déposer une lamelle au-dessus en évitant de créer des
bulles d’air. On observe au microscope optique à l’objectif GX40.
➢ La coloration de Gram : développée en 1884 par le médecin danois Christian Gram,
cette méthode de coloration est la plus largement utilisée en bactériologie. C’est une
coloration différentielle qui permet de Classer les bactéries en 2 catégories les
bactéries Gram + et les bactéries Gram- . La coloration de Gram permet de détecter la
morphologie bactérienne et d’observer le mode de regroupement. Le mode
opératoire a été suivi selon ces étapes (Willey, Sherwood et all, 2011):
- La préparation du frottis où les bactéries sont étalées sur une lame propre et
en laissant sécher et fixer physiquement l'étalement.
- La coloration où le violet de gentiane est appliquée sur le frottis pendant 1
minute, ensuite le colorant est rincé. Le but de cette étape est d’obtenir une
coloration primaire.
- La fixation où le lugol est appliqué pendant 1minute pour fixer le frottis, ce
colorant agit comme un mordant en augmentant les interactions avec la cellule
pour qu’elle soit plus fortement contrastée. Ensuite le frottis est rincée pour le
débarrasser du colorant.
- La décoloration où le frottis est décoloré avec un mélange d'alcool et d'acétone
pendant 15 secondes. Ensuite le frottis est rincé. Cette étape engendre l’aspect