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Dans la zone stérile et à l’aide d’une pipette graduée stérilisée, un prélèvement de
1 ml a été effectué sur chaque échantillon préparée ainsi que sur leur solutions
filles de dilution et ensemencées à la surface dans chaque milieu de culture
bactériologiques préparés : Gélose au Tergitol ; TCBS ; mannitol ; cetrimide ;
sabouraud (annexe 1). Ensuite, incuber dans l’étuve bactériologique et réglée à la
température de 37 C° pendant une durée de 24 à 72 heures (Willey, Sherwood et
all, 2011).
La purification et l’isolement : Les germes présents dans l'environnement se
trouvent souvent sous forme de mélanges de plusieurs espèces. La pureté a été
vérifiée par observation microscopique afin de confirmer l'uniformité
morphologique des bactéries (Willey, Sherwood et all, 2011). Pendant
l'incubation, chaque micro-organisme déposé se multiplie pour donner un clone
de cellules identiques. Cette opération permet une croissance d'une culture pure
d’une souche bactérienne en formant une colonie (Benaissa 2022).
Après une incubation de 24 à 72 heures à 37 °C, la croissance bactérienne ainsi
que les caractéristiques des colonies existantes ont été notées. Les colonies bien
définies et non contaminées par d’autres colonies ont été sélectionnées. Chaque
colonie a été prélevées à l’aide d’une anse à platine, réisolées par épuisement de
l’inoculum prélevé en l’étalant sous forme de stries à la surface de la nouvelle
boite de pétrie.
II.3.4.2 L’identification bactériologique par caractérisation morphologiques,
physiologiques et biochimique
L’identification des souches bactériennes isolées obtenues s’est basée sur la
détermination des caractères morphologiques qui constituent des critères d’orientation
très importants de l’identification bactérienne ainsi que sur les caractères
physiologiques et biochimiques (Marchal et al., 1988).
La détermination des caractères morphologiques
L’aspect et l’apparence des colonies bactériennes isolées varient selon le type de milieu
utilisé, la durée et la température d'incubation. Plusieurs critères sont considérés:
- La taille des colonies est appréciée selon leur diamètre. Une colonie est dite
petite si son diamètre ne dépasse pas 1 mm, Moyenne un diamètre entre 1 et 3
mm et grande pour Plus de 3 mm de diamètre.
- L’allure des contours où les bords des colonies peuvent présenter différents
aspects. Ils peuvent être lisses et réguliers ou irréguliers avec des extrémités
Dans la zone stérile et à l’aide d’une pipette graduée stérilisée, un prélèvement de
1 ml a été effectué sur chaque échantillon préparée ainsi que sur leur solutions
filles de dilution et ensemencées à la surface dans chaque milieu de culture
bactériologiques préparés : Gélose au Tergitol ; TCBS ; mannitol ; cetrimide ;
sabouraud (annexe 1). Ensuite, incuber dans l’étuve bactériologique et réglée à la
température de 37 C° pendant une durée de 24 à 72 heures (Willey, Sherwood et
all, 2011).
La purification et l’isolement : Les germes présents dans l'environnement se
trouvent souvent sous forme de mélanges de plusieurs espèces. La pureté a été
vérifiée par observation microscopique afin de confirmer l'uniformité
morphologique des bactéries (Willey, Sherwood et all, 2011). Pendant
l'incubation, chaque micro-organisme déposé se multiplie pour donner un clone
de cellules identiques. Cette opération permet une croissance d'une culture pure
d’une souche bactérienne en formant une colonie (Benaissa 2022).
Après une incubation de 24 à 72 heures à 37 °C, la croissance bactérienne ainsi
que les caractéristiques des colonies existantes ont été notées. Les colonies bien
définies et non contaminées par d’autres colonies ont été sélectionnées. Chaque
colonie a été prélevées à l’aide d’une anse à platine, réisolées par épuisement de
l’inoculum prélevé en l’étalant sous forme de stries à la surface de la nouvelle
boite de pétrie.
II.3.4.2 L’identification bactériologique par caractérisation morphologiques,
physiologiques et biochimique
L’identification des souches bactériennes isolées obtenues s’est basée sur la
détermination des caractères morphologiques qui constituent des critères d’orientation
très importants de l’identification bactérienne ainsi que sur les caractères
physiologiques et biochimiques (Marchal et al., 1988).
La détermination des caractères morphologiques
L’aspect et l’apparence des colonies bactériennes isolées varient selon le type de milieu
utilisé, la durée et la température d'incubation. Plusieurs critères sont considérés:
- La taille des colonies est appréciée selon leur diamètre. Une colonie est dite
petite si son diamètre ne dépasse pas 1 mm, Moyenne un diamètre entre 1 et 3
mm et grande pour Plus de 3 mm de diamètre.
- L’allure des contours où les bords des colonies peuvent présenter différents
aspects. Ils peuvent être lisses et réguliers ou irréguliers avec des extrémités