Chapitre 3
56
BEA. Les flacons destinés à recevoir les milieux de culture sont préalablement stérilisés à
l'autoclave, car ces milieux ne sont pas autoclavables. Le transfert des milieux dans les flacons
s'effectue dans des conditions stériles, entre deux becs Bunsen, afin de minimiser tout risque de
contamination. Une fois les milieux transférés dans les flacons, ils sont prêts à être versés dans
les boîtes de pétri pour la culture ultérieure des streptocoques.
Des dilutions à 10⁻¹ et à 10⁻² ont été préparées au préalable pour les coliformes et streptocoques
dans des flacons propre. Pour les dilutions à 10⁻¹, 90 ml d'eau distillée ont été ajoutés, tandis
que pour les dilutions à 10⁻², 99 ml d'eau distillée ont été ajoutés. Ensuite, les flacons ont été
stérilisés à l'autoclave à une température de 115 °C pendant 12 minutes.
Nous avons complété les flacons à une contenance totale de 100 ml avec les échantillons d'eau
de mer. Par la suite, nous avons procédé à la filtration de l'eau de mer concentrée et diluée à
10⁻¹ et à 10⁻² à travers des disques de filtration sur la rampe de filtration. Ces disques ont ensuite
été placés sur les milieux de culture préalablement versés dans les boîtes de Petri. Les boîtes
ont été incubées à différentes températures selon les bactéries recherchées : à 37 °C pour les
coliformes totaux, à 44 °C pour les coliformes fécaux, et à 37 °C pour les streptocoques
(Slanetz), pendant une durée de 24 heures. La lecture des boîtes a été effectuée 24 heures après
pour les coliformes. Pour les streptocoques, une seconde incubation à 37 °C pendant 24 heures
a été réalisée sur le milieu BEA. Cette étape implique la réalisation de stries sur le milieu de
culture afin de confirmer la présence des streptocoques fécaux (Annexe 3).
●
Enterobacteriaceae
L'identification des enterobacteriaceae requiert l'utilisation de plusieurs milieux de culture
distincts. Le premier, le bouillon de pré-enrichissement SFB, est préparé en dissolvant une
quantité précise de poudre dans un erlenmeyer, puis en complétant avec de l'eau distillée. Le
mélange est porté à ébullition sur une plaque chauffante magnétique. Le même processus est
répété pour la préparation du milieu SS. Les flacons destinés à recevoir les milieux doivent être
stériles et préalablement autoclavés, car ces milieux ne sont pas autoclavables. Le bouillon SFB
est transféré dans des flacons et prêt à recevoir les disques de filtration pour réaliser les
enrichissements. Quant au milieu SS, il est versé dans des boîtes de pétri et prêt à recevoir les
isolements après les enrichissements. Le détail du protocole est mis en Annexe 3.
La présence de colonies noires ou transparentes à centre noir peut indiquer la possible présence
de salmonelles.
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BEA. Les flacons destinés à recevoir les milieux de culture sont préalablement stérilisés à
l'autoclave, car ces milieux ne sont pas autoclavables. Le transfert des milieux dans les flacons
s'effectue dans des conditions stériles, entre deux becs Bunsen, afin de minimiser tout risque de
contamination. Une fois les milieux transférés dans les flacons, ils sont prêts à être versés dans
les boîtes de pétri pour la culture ultérieure des streptocoques.
Des dilutions à 10⁻¹ et à 10⁻² ont été préparées au préalable pour les coliformes et streptocoques
dans des flacons propre. Pour les dilutions à 10⁻¹, 90 ml d'eau distillée ont été ajoutés, tandis
que pour les dilutions à 10⁻², 99 ml d'eau distillée ont été ajoutés. Ensuite, les flacons ont été
stérilisés à l'autoclave à une température de 115 °C pendant 12 minutes.
Nous avons complété les flacons à une contenance totale de 100 ml avec les échantillons d'eau
de mer. Par la suite, nous avons procédé à la filtration de l'eau de mer concentrée et diluée à
10⁻¹ et à 10⁻² à travers des disques de filtration sur la rampe de filtration. Ces disques ont ensuite
été placés sur les milieux de culture préalablement versés dans les boîtes de Petri. Les boîtes
ont été incubées à différentes températures selon les bactéries recherchées : à 37 °C pour les
coliformes totaux, à 44 °C pour les coliformes fécaux, et à 37 °C pour les streptocoques
(Slanetz), pendant une durée de 24 heures. La lecture des boîtes a été effectuée 24 heures après
pour les coliformes. Pour les streptocoques, une seconde incubation à 37 °C pendant 24 heures
a été réalisée sur le milieu BEA. Cette étape implique la réalisation de stries sur le milieu de
culture afin de confirmer la présence des streptocoques fécaux (Annexe 3).
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Enterobacteriaceae
L'identification des enterobacteriaceae requiert l'utilisation de plusieurs milieux de culture
distincts. Le premier, le bouillon de pré-enrichissement SFB, est préparé en dissolvant une
quantité précise de poudre dans un erlenmeyer, puis en complétant avec de l'eau distillée. Le
mélange est porté à ébullition sur une plaque chauffante magnétique. Le même processus est
répété pour la préparation du milieu SS. Les flacons destinés à recevoir les milieux doivent être
stériles et préalablement autoclavés, car ces milieux ne sont pas autoclavables. Le bouillon SFB
est transféré dans des flacons et prêt à recevoir les disques de filtration pour réaliser les
enrichissements. Quant au milieu SS, il est versé dans des boîtes de pétri et prêt à recevoir les
isolements après les enrichissements. Le détail du protocole est mis en Annexe 3.
La présence de colonies noires ou transparentes à centre noir peut indiquer la possible présence
de salmonelles.