MATERIELS ET METHODES
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5.1.7. Recherche et dénombrement des Clostridium sulfito-réductrices
Mode opératoire
La recherche et le dénombrement des Clostridium sulfito-réducteurs sont effectués dans
des tubes, contenants des milieux composés de Sulfite de Sodium et de l'Alun de Fer, car ces
bactéries réduisent le Sulfite de Sodium et produisent une coloration noire en présence d'ions
de Fer.
Avant d'utiliser le milieu Viande Fois (VF), 0.5 ml de Sulfite de Sodium et quelques gouttes
d'Alun de Fer ont été aseptiquement ajoutés, dans un flacon contenant la gélose VF fondue et
refroidie, pour être homogénéisés par agitation.
5 ml de chaque dilution ont été placés dans des tubes vides stériles, à raison de 3 tubes par
dilution, puis ont été mis dans un bain-marie à 80 °C pendant 10 min, pour être juste, après
refroidir rapidement sous un robinet (choc thermique), afin de détruire les formes végétatives
et casser les spores éventuellement présentes.
La gélose VF en surfusion refroidie, précédemment préparée, a été aseptiquement ajoutée,
en 2 étapes, dans les tubes vides stériles contenant les suspensions, puis de l’huile de vaseline
stérile a été ajoutée pour garantir une culture en anaérobiose.
Lecture
Après 24 h d’incubation à 37 °C, la germination des spores des Clostridium sulfitoréducteurs apparaît sous forme de colonies noires. La première lecture doit se faire après 16 h,
pour éviter que les colonies envahissantes rendent l'interprétation difficile. Un tube est
considéré positif, s’il contient des colonies rondes noires, de diamètre supérieur à 0.5 mm, et le
calcule se fera selon la méthode NPP.
5.1.8. Recherche des vibrions
La recherche des Vibrions a été effectuée en deux étapes successives : un enrichissement
sélectif et un isolement. Pour l'enrichissement sélectif, 25 g de l’aliment ont été pesés puis 225
ml du milieu Eau Peptonée Salée Alcaline (EPSA) ont été ajoutés, après homogénéisation, le
flacon a été incubé à 41 °C pendant 24 h.
Pour l'isolement et l'identification présomptive, 0.1 ml du bouillon d'enrichissement incubé
a été l'ensemené sur une gélose Thiosulfate Citrate Bile Salt (TCBS), puis les boîtes ont été
incubées à 37 °C pendant 24 h. Les colonies saccharose positives, apparaissent jaunes en raison
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5.1.7. Recherche et dénombrement des Clostridium sulfito-réductrices
Mode opératoire
La recherche et le dénombrement des Clostridium sulfito-réducteurs sont effectués dans
des tubes, contenants des milieux composés de Sulfite de Sodium et de l'Alun de Fer, car ces
bactéries réduisent le Sulfite de Sodium et produisent une coloration noire en présence d'ions
de Fer.
Avant d'utiliser le milieu Viande Fois (VF), 0.5 ml de Sulfite de Sodium et quelques gouttes
d'Alun de Fer ont été aseptiquement ajoutés, dans un flacon contenant la gélose VF fondue et
refroidie, pour être homogénéisés par agitation.
5 ml de chaque dilution ont été placés dans des tubes vides stériles, à raison de 3 tubes par
dilution, puis ont été mis dans un bain-marie à 80 °C pendant 10 min, pour être juste, après
refroidir rapidement sous un robinet (choc thermique), afin de détruire les formes végétatives
et casser les spores éventuellement présentes.
La gélose VF en surfusion refroidie, précédemment préparée, a été aseptiquement ajoutée,
en 2 étapes, dans les tubes vides stériles contenant les suspensions, puis de l’huile de vaseline
stérile a été ajoutée pour garantir une culture en anaérobiose.
Lecture
Après 24 h d’incubation à 37 °C, la germination des spores des Clostridium sulfitoréducteurs apparaît sous forme de colonies noires. La première lecture doit se faire après 16 h,
pour éviter que les colonies envahissantes rendent l'interprétation difficile. Un tube est
considéré positif, s’il contient des colonies rondes noires, de diamètre supérieur à 0.5 mm, et le
calcule se fera selon la méthode NPP.
5.1.8. Recherche des vibrions
La recherche des Vibrions a été effectuée en deux étapes successives : un enrichissement
sélectif et un isolement. Pour l'enrichissement sélectif, 25 g de l’aliment ont été pesés puis 225
ml du milieu Eau Peptonée Salée Alcaline (EPSA) ont été ajoutés, après homogénéisation, le
flacon a été incubé à 41 °C pendant 24 h.
Pour l'isolement et l'identification présomptive, 0.1 ml du bouillon d'enrichissement incubé
a été l'ensemené sur une gélose Thiosulfate Citrate Bile Salt (TCBS), puis les boîtes ont été
incubées à 37 °C pendant 24 h. Les colonies saccharose positives, apparaissent jaunes en raison