MATERIELS ET METHODES
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d’hydrogène (H2O2) ont été ajoutées. L'effervescence qui en résulterait indique la présence de
catalase (réaction positive).
Test d’oxydase
Ce test met en évidence la capacité de la bactérie à oxyder un réactif incolore (NNdiméthyl-paraphénylène diamine), en un dérivé rose violacé.
Un disque non imprégné a été placé sur une lame propre, avec une pince flambée, puis une
goutte de réactif a été ajoutée sur ce disque. La colonie à tester, issue d’une culture pure a
ensuite été déposée sur le disque. L’apparition d’une couleur rose violacé, après 30 sec environ,
est le signe d’une réaction positive.
5.1.6. Recherche et dénombrement de salmonella
La recherche des Salmonelles est effectuée en trois étapes successives : Pré-enrichissement
sélectif, enrichissement sélectif et isolement, à fin d'augmenter les chances de détection, car
selon la grande majorité des normes, la présence de 1 UFC dans 25 g suffit à rendre le produit
impropre à la consommation (Guiraud et Rosec, 2004).
Mode opératoire
Pour le pré-enrichissement, 25 g de farine sont pesés et 225 ml de bouillon au sélénite
(SFB) ainsi que 4 disques SFB sont ajoutés dans des flacons stériles de 500 ml. Après agitation
pendant 2 minutes, les flacons sont incubés à 37 °C pendant 24 heures, et un changement de
couleur jaune-orange indique un résultat positif. Ensuite, l’enrichissement sélectif est réalisé en
inoculant aseptiquement 0.1 ml de la solution pré-incubée dans des tubes contenant 10 ml de
bouillon de sélénite cystine, suivie d'une incubation à 37 °C pendant 18-24 h. Pour l’isolement,
le bouillon d’enrichissement est ensemencé par la méthode de stries sur des milieux sélectifs
solides SS et Hektoen, puis incubé à 37 °C pendant 18 à 48 h.
Lecture
La lecture des résultats montre que sur la gélose SS, les salmonelles apparaissent sous
forme de colonies incolores transparentes avec ou sans centre noir, les shigelles comme des
colonies incolores, et les coliformes en colonies rouges ou roses. Sur la gélose Hektoen, les
salmonelles forment des colonies vertes avec ou sans centre noir, tandis que les shigelles
apparaissent incolores.
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d’hydrogène (H2O2) ont été ajoutées. L'effervescence qui en résulterait indique la présence de
catalase (réaction positive).
Test d’oxydase
Ce test met en évidence la capacité de la bactérie à oxyder un réactif incolore (NNdiméthyl-paraphénylène diamine), en un dérivé rose violacé.
Un disque non imprégné a été placé sur une lame propre, avec une pince flambée, puis une
goutte de réactif a été ajoutée sur ce disque. La colonie à tester, issue d’une culture pure a
ensuite été déposée sur le disque. L’apparition d’une couleur rose violacé, après 30 sec environ,
est le signe d’une réaction positive.
5.1.6. Recherche et dénombrement de salmonella
La recherche des Salmonelles est effectuée en trois étapes successives : Pré-enrichissement
sélectif, enrichissement sélectif et isolement, à fin d'augmenter les chances de détection, car
selon la grande majorité des normes, la présence de 1 UFC dans 25 g suffit à rendre le produit
impropre à la consommation (Guiraud et Rosec, 2004).
Mode opératoire
Pour le pré-enrichissement, 25 g de farine sont pesés et 225 ml de bouillon au sélénite
(SFB) ainsi que 4 disques SFB sont ajoutés dans des flacons stériles de 500 ml. Après agitation
pendant 2 minutes, les flacons sont incubés à 37 °C pendant 24 heures, et un changement de
couleur jaune-orange indique un résultat positif. Ensuite, l’enrichissement sélectif est réalisé en
inoculant aseptiquement 0.1 ml de la solution pré-incubée dans des tubes contenant 10 ml de
bouillon de sélénite cystine, suivie d'une incubation à 37 °C pendant 18-24 h. Pour l’isolement,
le bouillon d’enrichissement est ensemencé par la méthode de stries sur des milieux sélectifs
solides SS et Hektoen, puis incubé à 37 °C pendant 18 à 48 h.
Lecture
La lecture des résultats montre que sur la gélose SS, les salmonelles apparaissent sous
forme de colonies incolores transparentes avec ou sans centre noir, les shigelles comme des
colonies incolores, et les coliformes en colonies rouges ou roses. Sur la gélose Hektoen, les
salmonelles forment des colonies vertes avec ou sans centre noir, tandis que les shigelles
apparaissent incolores.