MATERIELS ET METHODES
50
Un tube de BLBVB, incubé à 44 °C, n’est considéré positif à la présence de coliformes
fécaux, que s’il présente les 3 caractéristiques suivantes, à savoir : la présence de trouble, qui
est signe de développement bactérien, la présence de gaz dans la cloche de Durham (> 1/10 de
volume), et le virage de la couleur du milieu (du vert au jaune), signe d’acidification due à la
fermentation du lactose.
Le résultat est exprimé en NPP, en se référant à la table de Mac Grady (Voir annexes).
Afin que le produit soit conforme, le taux de coliformes fécaux doit être de 10-10
2
UFC/g.
5.1.4.2. Recherche et dénombrement des coliformes fécaux, sur milieu solide
Mode opératoire
0.1 ml de chaque dilution, préalablement préparée, a été ensemencé en surface sur le milieu
solide TTC-Tergitol, à raison de 2 boîtes par dilution, puis les boites ensemencées ont été
incubées à 44 °C pendant 24-48 h.
Lecture
Les coliformes fécaux apparaissent sous forme de colonies rouges ou bordeaux avec un
halo jaune (lactose +).
5.1.4.3. Recherche d’Escherichia coli
Mode opératoire
1 ml a été prélevé des tubes positifs (BLBVB), résultant du dénombrement positif, des
coliformes fécaux et repiqué dans des tubes contenant le milieu Eau Peptonée Exempte
d’Indole, puis incubé à 44 °C pendant 24 h. Après incubation, le test MacKenzie a été effectué
par l’ajout de quelques gouttes du réactif de Kovac, où la présence d’E. coli est confirmée par
l’apparition d’un anneau rouge à la surface, signe de la production d’indole à partir de la
Tryptophane.
5.1.5. Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus
Mode opératoire
Des boîtes de milieu Chapman pré-coulées ont été inoculées par 0.1 ml de chaque dilution,
à raison de 2 boîtes par dilution, puis incubées à 37 °C pendant 24-48 h. Après incubation, les
colonies caractéristiques de S. aureus devraient être jaunes dorées, signe de la dégradation du
Mannitol.
50
Un tube de BLBVB, incubé à 44 °C, n’est considéré positif à la présence de coliformes
fécaux, que s’il présente les 3 caractéristiques suivantes, à savoir : la présence de trouble, qui
est signe de développement bactérien, la présence de gaz dans la cloche de Durham (> 1/10 de
volume), et le virage de la couleur du milieu (du vert au jaune), signe d’acidification due à la
fermentation du lactose.
Le résultat est exprimé en NPP, en se référant à la table de Mac Grady (Voir annexes).
Afin que le produit soit conforme, le taux de coliformes fécaux doit être de 10-10
2
UFC/g.
5.1.4.2. Recherche et dénombrement des coliformes fécaux, sur milieu solide
Mode opératoire
0.1 ml de chaque dilution, préalablement préparée, a été ensemencé en surface sur le milieu
solide TTC-Tergitol, à raison de 2 boîtes par dilution, puis les boites ensemencées ont été
incubées à 44 °C pendant 24-48 h.
Lecture
Les coliformes fécaux apparaissent sous forme de colonies rouges ou bordeaux avec un
halo jaune (lactose +).
5.1.4.3. Recherche d’Escherichia coli
Mode opératoire
1 ml a été prélevé des tubes positifs (BLBVB), résultant du dénombrement positif, des
coliformes fécaux et repiqué dans des tubes contenant le milieu Eau Peptonée Exempte
d’Indole, puis incubé à 44 °C pendant 24 h. Après incubation, le test MacKenzie a été effectué
par l’ajout de quelques gouttes du réactif de Kovac, où la présence d’E. coli est confirmée par
l’apparition d’un anneau rouge à la surface, signe de la production d’indole à partir de la
Tryptophane.
5.1.5. Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus
Mode opératoire
Des boîtes de milieu Chapman pré-coulées ont été inoculées par 0.1 ml de chaque dilution,
à raison de 2 boîtes par dilution, puis incubées à 37 °C pendant 24-48 h. Après incubation, les
colonies caractéristiques de S. aureus devraient être jaunes dorées, signe de la dégradation du
Mannitol.