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II.2.2.1.2 Teneur en protéines
La méthode de Kjeldahl (Crooke et Simpson, 1971) a été développée par Johan Kjeldahl,
chimiste danois, en 1883. Son principe consiste à doser la teneur en azote et d’utiliser un
coefficient de conversion pour estimer la teneur en protéines(LE ROUX, 2012).
Le dosage des protéines par la méthode de Kjeldahl se décompose en trois étapes : la matière
organique est minéralisée avec de l'acide sulfurique en présence de catalyseur au cuivre
(K2SO4+cuso4+se), l'azote total est converti en (NH4)2SO4, puis libéré par l'ajout de NaOH en
excès et la distillation à la vapeur d'ammoniac avec de l'acide borique extrait le NH3 des
échantillons minéralisés et enfin le NH3 libéré est déterminé par titrage avec de l'acide sulfurique
0,1 N(Grine et Aouad, 2020).
II.2.2.1.2.1 Mode opératoire
− Peser dans un tube à minéralisation une prise d'essai de 1 à 2g d’échantillon,
− ajouter 2 g de catalyseur (250g de K2SO4 ; 250g de CuSO4 et 5g de Se), avec 20mL
d’acide sulfurique pur (d=1.84),
− Porter le mélange sur le support d’attaque à 450°C jusqu’au changement de couleur vers
le vert qui indique la fin de la réaction. L'étape dure enivre 2h 30mins.
− Laisser refroidir, puis ajouter peu à peu, avec précaution 200 mL d’eau distillée en
agitant et en refroidissant sous un courant d’eau. Rincer l’agitateur. Laisser refroidir
complètement au trait de jauge.
− Transférer 10 à 50 mL le contenu du matras dans l’unité de distillation (Buchi) (Figure
II.2-6).
− Dans un bécher destiné à recueillir le distillat, introduire 20 mL de l’indicateur composé
de :
Pour 1l de solution : 20g d’acide borique
• 200 mL d’éthanol absolu
• 10 mL d’indicateur, contenant :
• 1 /4 de rouge de méthyle a 0.2% dans l’alcool a 95°C.
• 3/4 de vert de bromocrésol dans l’alcool a 95°C.
II.2.2.1.2 Teneur en protéines
La méthode de Kjeldahl (Crooke et Simpson, 1971) a été développée par Johan Kjeldahl,
chimiste danois, en 1883. Son principe consiste à doser la teneur en azote et d’utiliser un
coefficient de conversion pour estimer la teneur en protéines(LE ROUX, 2012).
Le dosage des protéines par la méthode de Kjeldahl se décompose en trois étapes : la matière
organique est minéralisée avec de l'acide sulfurique en présence de catalyseur au cuivre
(K2SO4+cuso4+se), l'azote total est converti en (NH4)2SO4, puis libéré par l'ajout de NaOH en
excès et la distillation à la vapeur d'ammoniac avec de l'acide borique extrait le NH3 des
échantillons minéralisés et enfin le NH3 libéré est déterminé par titrage avec de l'acide sulfurique
0,1 N(Grine et Aouad, 2020).
II.2.2.1.2.1 Mode opératoire
− Peser dans un tube à minéralisation une prise d'essai de 1 à 2g d’échantillon,
− ajouter 2 g de catalyseur (250g de K2SO4 ; 250g de CuSO4 et 5g de Se), avec 20mL
d’acide sulfurique pur (d=1.84),
− Porter le mélange sur le support d’attaque à 450°C jusqu’au changement de couleur vers
le vert qui indique la fin de la réaction. L'étape dure enivre 2h 30mins.
− Laisser refroidir, puis ajouter peu à peu, avec précaution 200 mL d’eau distillée en
agitant et en refroidissant sous un courant d’eau. Rincer l’agitateur. Laisser refroidir
complètement au trait de jauge.
− Transférer 10 à 50 mL le contenu du matras dans l’unité de distillation (Buchi) (Figure
II.2-6).
− Dans un bécher destiné à recueillir le distillat, introduire 20 mL de l’indicateur composé
de :
Pour 1l de solution : 20g d’acide borique
• 200 mL d’éthanol absolu
• 10 mL d’indicateur, contenant :
• 1 /4 de rouge de méthyle a 0.2% dans l’alcool a 95°C.
• 3/4 de vert de bromocrésol dans l’alcool a 95°C.