CHAPITRE III
62
1.10. Dosage des protéines
- Principe : L’analyse des protéines dans le foie et le tube digestif des juvéniles du tilapia est
effectué selon la méthode de Lowry (Lowry et al., 1951). En milieu alcalin, le réactif cuivrique
catalyse l’oxydation des acides aminés aromatiques, avec réduction de l'acide
phosphomolybdique et tungstique (réactif Folin-Ciocalteu) pour donner lieu à la formation d’un
complexe coloré bleu foncé, qui a une absorbance maximale à 660 nm.
- Réactifs :
- Solution analytique :
(a) 50 ml de sodium carbonate à 2 % avec 50 ml de NaOH 0.1 N.
(b) 10 ml de sulfate de cuivre à 1.56 % avec 10 ml de sodium potassium tartarate à 2.37 %.
La solution analytique est préparée en mélangeant 2 ml de la solution (b) avec 100 ml de la
solution (a).
- Réactif de Folin-Ciocalteu 1 N : Dilution de la solution commerciale du Folin-Ciocalteau (2
N) avec le même volume d’eau distillée
- L'albumine de sérum bovin (ASB) à 1 mg/ml
- Courbe d’étalonnage
A partir de la solution mer de ASB (1 mg/ml), on prépare 07 étalons à des concentrations
comprises entre 0.05 et 1 mg/ml. Dans une série de tubes à essai, on ajoute 0.2 ml de chacune
des dilutions et 2 ml de la solution analytique, puis on laisse incuber pendant 10 min à
température ambiante. Dans chaque tube, on rajoute 0.2 ml du réactif de Folin-Ciocalteu et on
laisse incuber pendant 30 min. Les absorbances à 660 nm sont déterminées à l’aide d’un
spectrophotomètre.
Figure 33. Courbe d’étalonnage des protéines
y = 0,6131x
R² = 0,9816
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Absorbance
mg ASB / ml