CHAPITRE III
61
ε: Coefficient d’extinction molaire de H2O2 en cm
2 /µmole (= 0.0436)
1.9.2. Superoxyde dismutase
- Principe : L’analyse de l’activité de superoxyde dismutase (SOD) dans le foie des juvéniles
du tilapia est effectué selon la méthode de Marklund & Marklund (1974). Le principe est basé
sur la capacité de l'enzyme à inhiber l'autoxydation du pyrogallol, à travers la dismutation des
radicaux superoxydes (O2
-
) libres. Le taux d’autoxydation du pyrogallol est déterminé à partir
de l’augmentation de l’absorbance à 325 nm.
- Réactifs :
- Tampon Tris-EDTA (pH=8.2) : Dissolution de 1.21 g de Tris et 37.2 mg de sel disodique
de l'EDTA dans 100 ml d’eau distillée. Le pH est ajusté à 8.2 par le HCl.
- Solution de pyrogallol à 20 mM dans le HCL 10 mM.
- Mode opératoire :
Dans une cuve en quartz, 2.9 ml de tampon Tris-EDTA incubé à 25°C ont été ajoutés à 50 µl
de la solution pyrogallol et 50 µl de l'échantillon (solution A). Un contrôle a été préparé de la
même manière, en remplaçant le volume d’échantillon par de l’eau distillée (solution B).
L'absorbance de chaque solution a été mesurée à 325 nm pendant une minute en utilisant un
spectrophotomètre en mode cinétique (annexe 04).
- L’expression des résultats :
Une unité de l’activité SOD corresponde à la quantité d’enzyme nécessaire pour l’inhibition de
50% de l’autoxydation du pyrogallol à 25°C. L’activité enzymatique est calculée par la formule
suivante (source : Creative Enzymes) :
ΔA325 B : La variation de l’absorbance par minute de la solution B
ΔA325 A : La variation de l’absorbance par minute de la solution A
Vt : Volume du mélange réactionnel (3 ml)
V : Volume de l’échantillon (0.05 ml)
U/ml de l’activité SOD =
(ΔA325 B- ΔA325 A)/ ΔA325 B × 100% × Vt
………….(20)
50% × V