CHAPITRE III
60
µmol maltose : déterminé à partir de la courbe d’étalonnage
FD : facteur de dilution
v : volume d’échantillon utilisé
t : temps de réaction en minutes (3 min)
1.9. Dosage des enzymes antioxydants
1.9.1. Catalase
- Principe : L’analyse de l’activité de la catalase (CAT) est effectué dans le foie des juvéniles
du tilapia selon la méthode décrite par Aebi (1984). La CAT est une oxydoréductase héminique
qui catalyse la dismutation du peroxyde d'hydrogène (H2O2) en eau et en dioxygène. La
disparition d’ H2O2 est suivie directement à travers la diminution de l’absorbance à 240 nm par
unité de temps, qui corresponde à l’activité catalase.
- Réactifs :
- Tampon phosphate 67 mM (pH = 7) : Dissolution de 3.522 g de Potassium dihydrogène
phosphate (KH2PO4) et 7.268 g de Sodium phosphate monobasique monohydrate
(Na2HPO4.H2O) dans 900 ml d’eau distillée, puis on ajuste le pH à 7 et on complète de
volume à 1000 ml.
- Peroxyde d’hydrogène à 3% (m/v).
- Mode opératoire :
Dans une série de tubes, on met 2.5 ml de tampon phosphate avec 0.1 ml de H2O2 et on laisse
incuber à 25°C pendant quelques minutes. Ensuite, 20 µl de l'échantillon ont été ajoutés, et le
mélange a été transféré dans une cuve en quartz. L’absorbance à 240 nm a été mesurée en mode
cinétique pendant 1 minute, contre un blanc contenant uniquement le tampon phosphate
(annexe 03).
- L’expression des résultats :
Une unité de l’activité catalase corresponde à la quantité d’enzyme qui décompose 1 µmol
d’H2O2 par minute à 25°C. L’activité enzymatique est déterminée selon la formule suivante :
U / ml de l’activité Catalase = (|ΔA240/min| × Vt × FD) / (Ve × ε)……….. (19)
ΔA240/min : La variation de l’absorbance par minute
Vt : Volume du mélange réactionnel en ml (=2.62)
Ve : Volume d’échantillon en ml (=0.02)
FD : Facteur de dilution (= 1)
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µmol maltose : déterminé à partir de la courbe d’étalonnage
FD : facteur de dilution
v : volume d’échantillon utilisé
t : temps de réaction en minutes (3 min)
1.9. Dosage des enzymes antioxydants
1.9.1. Catalase
- Principe : L’analyse de l’activité de la catalase (CAT) est effectué dans le foie des juvéniles
du tilapia selon la méthode décrite par Aebi (1984). La CAT est une oxydoréductase héminique
qui catalyse la dismutation du peroxyde d'hydrogène (H2O2) en eau et en dioxygène. La
disparition d’ H2O2 est suivie directement à travers la diminution de l’absorbance à 240 nm par
unité de temps, qui corresponde à l’activité catalase.
- Réactifs :
- Tampon phosphate 67 mM (pH = 7) : Dissolution de 3.522 g de Potassium dihydrogène
phosphate (KH2PO4) et 7.268 g de Sodium phosphate monobasique monohydrate
(Na2HPO4.H2O) dans 900 ml d’eau distillée, puis on ajuste le pH à 7 et on complète de
volume à 1000 ml.
- Peroxyde d’hydrogène à 3% (m/v).
- Mode opératoire :
Dans une série de tubes, on met 2.5 ml de tampon phosphate avec 0.1 ml de H2O2 et on laisse
incuber à 25°C pendant quelques minutes. Ensuite, 20 µl de l'échantillon ont été ajoutés, et le
mélange a été transféré dans une cuve en quartz. L’absorbance à 240 nm a été mesurée en mode
cinétique pendant 1 minute, contre un blanc contenant uniquement le tampon phosphate
(annexe 03).
- L’expression des résultats :
Une unité de l’activité catalase corresponde à la quantité d’enzyme qui décompose 1 µmol
d’H2O2 par minute à 25°C. L’activité enzymatique est déterminée selon la formule suivante :
U / ml de l’activité Catalase = (|ΔA240/min| × Vt × FD) / (Ve × ε)……….. (19)
ΔA240/min : La variation de l’absorbance par minute
Vt : Volume du mélange réactionnel en ml (=2.62)
Ve : Volume d’échantillon en ml (=0.02)
FD : Facteur de dilution (= 1)