CHAPITRE III
59
- Réactif de DNS : dissolution de 1g de DNS dans 50 ml d’eau distillée et addition de 30 g
de sodium potassium tartrate trihydraté et 20 ml de NaOH (2N) et ajustement du volume à
1000 ml.
- Solution de maltose à 10 µmol/ml
- Courbe d’étalonnage :
A partir de la solution mer de maltose, dix dilutions ont été préparées avec des concentrations
entre 0.3 et 6 µmol/ml. Dans une série de tubes à essai, 1 ml de chaque dilution de maltose a
été ajouté à 1 ml de réactif DNS, puis l'ensemble a été incubé dans un bain-marie à 100°C
pendant 5 minutes. Après incubation, 10 ml d'eau distillée ont été ajoutés à chaque tube.
L'absorbance de chaque solution a été mesurée à 540 nm en utilisant un spectrophotomètre.
Figure 32. Courbe d’étalonnage de maltose
- Mode opératoire :
Dans une série de tubes à essai, 0,5 ml de la solution d'amidon (1%) et 0,5 ml de l'échantillon
dilué ont été ajoutés, et l'ensemble a été laissé à incuber pendant 3 minutes à 25°C. La réaction
a été stoppée par addition de 1 ml de réactif de DNS, suivi d'une incubation de 5 minutes dans
de l'eau bouillante. Après refroidissement à la température ambiante, 10 ml d'eau distillée ont
été ajoutés et la densité optique de chaque solution a été mesurée à 540 nm.
- L’expression des résultats :
Une unité de l’activité de l’alpha-amylase corresponde à la quantité d’enzyme nécessaire pour
libérer 1 µmol de maltose par minute à 25°C. L’activité est calculée selon la formule suivante :
U / ml d’α-amylase = µmol maltose × FD / t × v……………. (18)
y = 0,1383x
R² = 0,9925
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
0
1
2
3
4
5
6
7
Absorbance
µmol maltose/ ml