CHAPITRE III
57
- Réactifs :
- Tampon potassium phosphate 50mM (pH 7.5) : Préparation d’une solution à 11.4 mg/ml de
potassium phosphate dibasic tri-hydraté, puis ajustement du pH à 7.5 avec le HCl 1M.
- Caséine à 1% : Préparation d’une solution de 10 mg/ml de caséine de lait bovin dans le
tampon potassium phosphate. La température est élevée progressivement à 80-85°C avec
agitation douce jusqu’à dissolution complète, puis le pH est ajusté à 7.5 avec le NaOH.
- Acide trichloroacétique (TCA) à 5%
- Carbonate de sodium anhydre 500 mM (53 mg/ml)
- Solution de Folin-Ciocalteu 2M.
- Solution de L-tyrosine (0.1 mg/ml)
- Courbe d’étalonnage :
A partir de la solution mère de L-tyrosine, on prépare 05 dilutions avec des concentrations de
5, 10, 20, 40 et 50 µg/ml. Dans des tubes à essai de 10 ml, on met 1 ml de chacune des dilutions,
2.5 ml de Na2CO3 et 0.5 ml de réactif de Folin-Ciocalteu dilué 4 fois.
Après une centrifugation de 05 min à 9000 tr/mn, la lecture des densités optiques est effectuée
à 660 nm contre un blanc établi avec de l’eau distillée.
Figure 31. Courbe d’étalonnage de tyrosine
- Mode opératoire :
Dans une série de tube à essais déposés dans un bain marie à 37°C, on met 1 ml de caséine
(1%), puis on rajoute 1 ml de l’échantillon dilué. Les dosages sont effectués en réplicas.
Après une incubation à 37°C pendant 10 min pour les échantillons du tube digestif et 20 min
pour les échantillons du foie, la réaction est stoppée en ajoutant 4 ml de TCA. Un blanc est
y = 0,0155x
R² = 0,9987
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
0
10
20
30
40
50
60
Absorbance
µg de tyrosine/ ml