CHAPITRE III
56
80°C (marque LABOLOGIC) jusqu’à utilisation. Le poids individuel et le sexe des poissons
prélevés sont enregistrés dans le cahier du suivi.
Figure 30. Opération de dissection et conservation des échantillons
1.7. Préparation des homogénats
Les échantillons de tube digestif et du foie sont dégelés dans un bécher, puis coupés en petits
morceaux et dilués 10 fois dans une solution tampon Tris-HCl (pH 7.5), avant d’être
homogénéisés à l’aide d’un mixeur électrique. Toutes les manipulations sont effectuées sur la
glace (à une température de 4°C).
Les homogénats sont centrifugés à 6000 tr/mn pendant 60 minutes à 4°C, à l’aide d’une
centrifugeuse réfrigérée (Centurion Scientific K3). Le surnageant de chaque échantillon est
transféré dans six tubes Eppendorfs de 1.5 ml et conservés à -80°C pour effectuer les dosages
enzymatiques ultérieurement.
1.8. Dosage de l’activité des enzymes digestives
1.8.1. Protéases
- Principe : Le dosage des protéases dans le tube digestif et le foie des juvéniles du tilapia a été
effectué selon la méthode décrite par Cupp-Enyard (2008) et Anasori et al. (2015), en utilisant
la caséine comme substrat. L’hydrolyse enzymatique de la caséine libère la tyrosine ainsi que
d’autres acides aminés et des fragments de peptides. Le réactif de Folin-Ciocalteu réagit
principalement avec la tyrosine libre en donnant une coloration bleue permettant un dosage
colorimétrique. Les valeurs de l’absorbance sont comparées à une courbe d’étalonnage établie
en utilisant une solution standard de tyrosine.
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80°C (marque LABOLOGIC) jusqu’à utilisation. Le poids individuel et le sexe des poissons
prélevés sont enregistrés dans le cahier du suivi.
Figure 30. Opération de dissection et conservation des échantillons
1.7. Préparation des homogénats
Les échantillons de tube digestif et du foie sont dégelés dans un bécher, puis coupés en petits
morceaux et dilués 10 fois dans une solution tampon Tris-HCl (pH 7.5), avant d’être
homogénéisés à l’aide d’un mixeur électrique. Toutes les manipulations sont effectuées sur la
glace (à une température de 4°C).
Les homogénats sont centrifugés à 6000 tr/mn pendant 60 minutes à 4°C, à l’aide d’une
centrifugeuse réfrigérée (Centurion Scientific K3). Le surnageant de chaque échantillon est
transféré dans six tubes Eppendorfs de 1.5 ml et conservés à -80°C pour effectuer les dosages
enzymatiques ultérieurement.
1.8. Dosage de l’activité des enzymes digestives
1.8.1. Protéases
- Principe : Le dosage des protéases dans le tube digestif et le foie des juvéniles du tilapia a été
effectué selon la méthode décrite par Cupp-Enyard (2008) et Anasori et al. (2015), en utilisant
la caséine comme substrat. L’hydrolyse enzymatique de la caséine libère la tyrosine ainsi que
d’autres acides aminés et des fragments de peptides. Le réactif de Folin-Ciocalteu réagit
principalement avec la tyrosine libre en donnant une coloration bleue permettant un dosage
colorimétrique. Les valeurs de l’absorbance sont comparées à une courbe d’étalonnage établie
en utilisant une solution standard de tyrosine.