CHAPITRE II
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- Réactifs :
- Solution de glucose (100 mg/L)
- Acide sulfurique (98%)
- Phénol (5%)
- Courbe d’étalonnage : Dans une série de tubes on met 0.2 – 0.4 – 0.6 – 0.8 et 1 ml de la
solution mère de glucose et on complète le volume à 1 ml avec l’eau distillée (les étalons sont
préparés en réplicas). Ensuite, 1 ml de phénol est ajouté à chaque tube, suivi de 5 ml d'acide
sulfurique. Les tubes sont placés dans un bain marie à 100°C pendant 5 min, puis refroidir à
l’obscurité pendant 30 min. La densité optique de chaque solution est mesurée à 490 nm à l'aide
d’un spectrophotomètre, contre un blanc préparé avec l’eau distillée.
Figure 21. Courbe d’étalonnage de glucose
- Mode opératoire :
- Dans un tube à essai, on met 100 mg d’échantillon et 5 ml d’acide sulfurique 0.5 M et en place
les tubes dans un bain-marie à 100°C pendant 3 heures.
- Après refroidissement, on neutralise les solutions avec les carbonates de sodium jusqu’à arrêt
d’effervescence, et on complète le volume à 100 ml avec l’eau distillée.
- On prélève 0.1 et 0.2 ml de la solution dans un tube à essai et on complète le volume à 1 ml
avec l’eau distillée.
- On rajoute 1 ml de phénol, 5 ml d’acide sulfurique (98%) et on place les tubes à 100°C pendant
5 minutes dans un bain-marie.
- Après refroidissement à l’obscurité pendant 30 min, l’absorbance à 490 nm est déterminée par
spectrophotométrie en utilisant un blanc de référence préparé de manière similaire, en
remplaçant l'échantillon par de l'eau distillée.
y = 0,0081x
R² = 0,989
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
0
20
40
60
80
100
120
Absorbance
Glucose mg/L