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Chapitre II
Matériel et méthodes
II.2.2. Préculture et sélection des souches performantes
A partir des isolats purifiés avec la 1
ère méthode, nous avons sélectionné 10 boites contenant
des isolats purifiés ; dont5 isolats provenant du décanteur secondaire, 2 isolats de l’aérateur
biologique de la STEP de Chenoua et 3 isolats du bassin de la ferme du CNRDPA. À l'aide
d'une anse de platine, nous avons prélevé un fragment de colonie de chaque isolat et le transféré
dans des erlenmeyers contenant 50 ml de milieu BG11 stérile.
Les erlenmeyers ont été couvert par du papier aluminium et placés dans l’incubateur agitateur
à une température de 25 °C et à une vitesse de 150 tours/min avec une luminosité de 1000 LUX
pendant 15 jours.
Pour suivre la croissance des isolats, nous avons effectué des mesures régulières de la densité
optique à une longueur d'onde de 750 nm à l'aide d'un spectrophotomètre. Nous avons
sélectionné les isolats présentant une croissance maximale.
II.2.3. Identification des isolats performants
Après 15 jours d'incubation, nous avons identifié les isolats à forte croissance. Ces isolats seront
utilisés pour le traitement des eaux aquacoles. Ils ont été identifiés par microscope inversé selon
le protocole suivant :
Pour l'observation des microalgues, la préparation de l'échantillon implique de fixer les
organismes avec du Lugol. Ensuite, il est nécessaire d'homogénéiser l'échantillon en effectuant
30 retournements doux du flacon ou en utilisant un agitateur mélangeur rotatif. Une fois
l'échantillon homogénéisé, il faut remplir la chambre d'observation en veillant à ne pas piéger
de bulles d'air. Pour assurer une sédimentation adéquate, il est recommandé de placer la
chambre sur un plan horizontal à l'abri de la lumière directe, en évitant les vibrations, De plus,
il est important de noter que le temps de sédimentation dépend du volume de la cuve : il faut
compter environ 8 heures pour une cuve de 10 ml. (Figure 15) (Neaud Masson, 2015).
Chapitre II
Matériel et méthodes
II.2.2. Préculture et sélection des souches performantes
A partir des isolats purifiés avec la 1
ère méthode, nous avons sélectionné 10 boites contenant
des isolats purifiés ; dont5 isolats provenant du décanteur secondaire, 2 isolats de l’aérateur
biologique de la STEP de Chenoua et 3 isolats du bassin de la ferme du CNRDPA. À l'aide
d'une anse de platine, nous avons prélevé un fragment de colonie de chaque isolat et le transféré
dans des erlenmeyers contenant 50 ml de milieu BG11 stérile.
Les erlenmeyers ont été couvert par du papier aluminium et placés dans l’incubateur agitateur
à une température de 25 °C et à une vitesse de 150 tours/min avec une luminosité de 1000 LUX
pendant 15 jours.
Pour suivre la croissance des isolats, nous avons effectué des mesures régulières de la densité
optique à une longueur d'onde de 750 nm à l'aide d'un spectrophotomètre. Nous avons
sélectionné les isolats présentant une croissance maximale.
II.2.3. Identification des isolats performants
Après 15 jours d'incubation, nous avons identifié les isolats à forte croissance. Ces isolats seront
utilisés pour le traitement des eaux aquacoles. Ils ont été identifiés par microscope inversé selon
le protocole suivant :
Pour l'observation des microalgues, la préparation de l'échantillon implique de fixer les
organismes avec du Lugol. Ensuite, il est nécessaire d'homogénéiser l'échantillon en effectuant
30 retournements doux du flacon ou en utilisant un agitateur mélangeur rotatif. Une fois
l'échantillon homogénéisé, il faut remplir la chambre d'observation en veillant à ne pas piéger
de bulles d'air. Pour assurer une sédimentation adéquate, il est recommandé de placer la
chambre sur un plan horizontal à l'abri de la lumière directe, en évitant les vibrations, De plus,
il est important de noter que le temps de sédimentation dépend du volume de la cuve : il faut
compter environ 8 heures pour une cuve de 10 ml. (Figure 15) (Neaud Masson, 2015).