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Chapitre II
Matériel et méthodes
Les erlenmeyers contenant les échantillons pré-enrichis ont été incubé à une température de 25
°C et une vitesse d’agitation de 150 tr/min avec un éclairage continu (environ 1000 Lux)
pendant 15 jours.
Après cette étape, nous avons effectué l'ensemencement en surface des microalgues préenrichies sur des milieux BG11 solides. Les boites contenant ces milieux ont été incubées
pendant 15 jours dans le réfrigérateur-incubateur. Les colonies isolées et bien développées ont
été sélectionnées pour l’étape de purification.
II.1.4. Purification des isolats de microalgues
Pour effectuer la purification des microalgues, nous avons utilisé les colonies obtenues à partir
des boîtes de la première méthode d'isolement. La sélection des colonies à purifier s'est faite à
l'aide d'un microscope optique avec un grossissement de ×100.
Le microscope optique nous a permis d'observer les colonies de microalgues de manière
détaillée, en mettant l'accent sur leur morphologie, leur taille et d'autres caractéristiques
distinctives. En ajustant la mise au point et l'éclairage.
Une fois les colonies sélectionnées, nous avons effectué des repiquages successifs sur le milieu
BG11 solide par la méthode des stries pour obtenir des souches pures. Le repiquage consiste à
transférer un fragment de colonie, à l’aide d’une anse de platine, à une nouvelle boite de pétri
contenant le BG11. Ce processus a été répété plusieurs fois jusqu’à l’arrivé à des souches pures.
II.2. Traitement des eaux aquacoles par les microalgues purifiées
II.2.1. Nature de l’effluent à traiter
Dans le cadre de notre étude, nous avons sélectionné une eau d'un bassin d'élevage de tilapia
situé à l'École Supérieure Nationale des Sciences de la Mer et de l'Aménagement du Littoral
(ENSSMAL). Avant de procéder au traitement de cette eau par les microalgues, nous avons le
filtré sur disque filtrant standard (porosité 5-10 µm) puis l’autoclavé avant d’effectuer une
analyse physicochimique pour le caractériser.
Cette caractérisation consiste en mesure des paramètres in-situ à savoir : la température (°C), le
potentiel hydrogène (pH), la conductivité électrique (µs/cm), la salinité (PSU) et l’oxygène
dissous (mg/l), ainsi qu’une analyse chimique des nitrates, nitrite, ammonium, phosphate total,
azote total et demande chimique on oxygène.
Chapitre II
Matériel et méthodes
Les erlenmeyers contenant les échantillons pré-enrichis ont été incubé à une température de 25
°C et une vitesse d’agitation de 150 tr/min avec un éclairage continu (environ 1000 Lux)
pendant 15 jours.
Après cette étape, nous avons effectué l'ensemencement en surface des microalgues préenrichies sur des milieux BG11 solides. Les boites contenant ces milieux ont été incubées
pendant 15 jours dans le réfrigérateur-incubateur. Les colonies isolées et bien développées ont
été sélectionnées pour l’étape de purification.
II.1.4. Purification des isolats de microalgues
Pour effectuer la purification des microalgues, nous avons utilisé les colonies obtenues à partir
des boîtes de la première méthode d'isolement. La sélection des colonies à purifier s'est faite à
l'aide d'un microscope optique avec un grossissement de ×100.
Le microscope optique nous a permis d'observer les colonies de microalgues de manière
détaillée, en mettant l'accent sur leur morphologie, leur taille et d'autres caractéristiques
distinctives. En ajustant la mise au point et l'éclairage.
Une fois les colonies sélectionnées, nous avons effectué des repiquages successifs sur le milieu
BG11 solide par la méthode des stries pour obtenir des souches pures. Le repiquage consiste à
transférer un fragment de colonie, à l’aide d’une anse de platine, à une nouvelle boite de pétri
contenant le BG11. Ce processus a été répété plusieurs fois jusqu’à l’arrivé à des souches pures.
II.2. Traitement des eaux aquacoles par les microalgues purifiées
II.2.1. Nature de l’effluent à traiter
Dans le cadre de notre étude, nous avons sélectionné une eau d'un bassin d'élevage de tilapia
situé à l'École Supérieure Nationale des Sciences de la Mer et de l'Aménagement du Littoral
(ENSSMAL). Avant de procéder au traitement de cette eau par les microalgues, nous avons le
filtré sur disque filtrant standard (porosité 5-10 µm) puis l’autoclavé avant d’effectuer une
analyse physicochimique pour le caractériser.
Cette caractérisation consiste en mesure des paramètres in-situ à savoir : la température (°C), le
potentiel hydrogène (pH), la conductivité électrique (µs/cm), la salinité (PSU) et l’oxygène
dissous (mg/l), ainsi qu’une analyse chimique des nitrates, nitrite, ammonium, phosphate total,
azote total et demande chimique on oxygène.