Chapitre II : Matériel et méthodes
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1.2 Identification des entérocoques
I.2.1 Coloration de Gram
La coloration de Gram, est une méthode couramment utilisée en microbiologie pour différencier
et classifier les bactéries en fonction de leur réaction face à des colorants spécifiques. Cette
technique doit son nom au scientifique danois Hans Christian Gram, qui l'a développée en 1884.
Mode opératoire
A - Faire un frottis :
1. Nettoyer une lame à l'alcool.
3. Frotter l’anse qui contient les entérocoques sur la lame
4. Laisser sécher à l'air.
5. Passer 3 fois la lame dans la petite flamme du bec Bunsen pour fixer l'échantillon à la chaleur.
B - Coloration :
1. Déposer quelques gouttes de solution de violet de gentiane sur le frottis fixé. Laisser
agir 1 minute. (Le violet de gentiane colore le cytoplasme des bactéries.)
2. Jeter l'excès de colorant dans un bécher.
3. Rincer très brièvement en faisant couler de l'eau sur la lame au-dessus du frottis (pas
directement sur le frottis).
4. Déposer quelques gouttes de Lugol sur le frottis. (Le Lugol permet de fixer le violet
dans les bactéries.)
5. Laisser agir 1 minute.
6. Jeter la solution de Lugol dans un bécher et rincer brièvement à l'eau courante comme
précédemment décrit.
7. Décolorer en faisant couler la solution de décoloration sur la lame jusqu'à ce que le
violet ne s'écoule plus du frottis (5 à 10 secondes). (La solution de décoloration contient
un mélange d'alcool et d'acétone.)
8. Rincer encore une fois à l'eau.
9. Laisser sécher à l'air libre.
10. Observer au microscope, à l’objectif x40 puis x100 en ajoutant une goutte de l’huile à
immersion.
Les bactéries à Gram positif ont une coloration violette alors que les bactéries à Gram négatif
ont une coloration rose.
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1.2 Identification des entérocoques
I.2.1 Coloration de Gram
La coloration de Gram, est une méthode couramment utilisée en microbiologie pour différencier
et classifier les bactéries en fonction de leur réaction face à des colorants spécifiques. Cette
technique doit son nom au scientifique danois Hans Christian Gram, qui l'a développée en 1884.
Mode opératoire
A - Faire un frottis :
1. Nettoyer une lame à l'alcool.
3. Frotter l’anse qui contient les entérocoques sur la lame
4. Laisser sécher à l'air.
5. Passer 3 fois la lame dans la petite flamme du bec Bunsen pour fixer l'échantillon à la chaleur.
B - Coloration :
1. Déposer quelques gouttes de solution de violet de gentiane sur le frottis fixé. Laisser
agir 1 minute. (Le violet de gentiane colore le cytoplasme des bactéries.)
2. Jeter l'excès de colorant dans un bécher.
3. Rincer très brièvement en faisant couler de l'eau sur la lame au-dessus du frottis (pas
directement sur le frottis).
4. Déposer quelques gouttes de Lugol sur le frottis. (Le Lugol permet de fixer le violet
dans les bactéries.)
5. Laisser agir 1 minute.
6. Jeter la solution de Lugol dans un bécher et rincer brièvement à l'eau courante comme
précédemment décrit.
7. Décolorer en faisant couler la solution de décoloration sur la lame jusqu'à ce que le
violet ne s'écoule plus du frottis (5 à 10 secondes). (La solution de décoloration contient
un mélange d'alcool et d'acétone.)
8. Rincer encore une fois à l'eau.
9. Laisser sécher à l'air libre.
10. Observer au microscope, à l’objectif x40 puis x100 en ajoutant une goutte de l’huile à
immersion.
Les bactéries à Gram positif ont une coloration violette alors que les bactéries à Gram négatif
ont une coloration rose.