Chapitre II
Matériel et méthodes
29
Les colonies de staphylococcus sont rondes, régulières, bombées, opaques et pigmentées en
jaune-doré, elles sont entourées d’un halo jaune correspondant à une acidification à partir du
mannitol (mannitol+)
Des tests d’oxydase, de catalase et de coagulase ont été réalisés sur les colonies suspectées.
II.3.2.4.La recherche des salmonelles
La recherche des salmonelles est réalisée sur 25g d’échantillon et comporte plusieurs étapes
successives à savoir (Gldel et Curbion, 1991) :
Le pré-enrichissement
Les 25 g de chair broyés de chaque poisson cible sont mélangé à 225 ml de milieu SFB
contenant 4 disques SFB. La suspension est ensuite incubée à 37°C pendant 24 heures.
Enrichissement
On introduit, aseptiquement, 1 ml de la solution de pré-enrichissement dans un tube à essai de
10ml SFB contenant 1 disque SFB. Puis, ils ont été incubés à 37°C pendant 24 heures.
Isolement
A partir du bouillon d’enrichissement, un ensemencement dans un milieu sélectif (gélose SS)
est réalisé. L’incubation est réalisée à 37 °C pendant 24 heures.
Les colonies suspectée apparaissent transparentes avec ou sans centre noir (coloration noir
due à la production de H2S). Une identification biochimique est entamée, par la suite, avec
une coloration de Gram (bacille Gram négatif), application d’un test d’oxydase (oxydase
positif) et enfin une identification bactérienne sur galerie Api 20E.
II.3.3. Confirmation biochimique et identification
II.3.3.1. Coloration de Gram
La coloration de Gram est la coloration de base de la bactériologie. C'est une coloration
double qui permet de différencier les bactéries non seulement d'après leur forme et leur
disposition, mais surtout d'après leur affinité pour les colorants liée à la structure de la paroi
(Lezzar et Abdelmalek, 2016).
Selon la norme (ISO 7218, 2007), le protocole est le suivant :
1. Préparer un frottis d’une culture bactérienne.
2. Recouvrir le frottis de violet de gentiane et laisser agir 1 minute ; rincer à l'eau
distillée
Matériel et méthodes
29
Les colonies de staphylococcus sont rondes, régulières, bombées, opaques et pigmentées en
jaune-doré, elles sont entourées d’un halo jaune correspondant à une acidification à partir du
mannitol (mannitol+)
Des tests d’oxydase, de catalase et de coagulase ont été réalisés sur les colonies suspectées.
II.3.2.4.La recherche des salmonelles
La recherche des salmonelles est réalisée sur 25g d’échantillon et comporte plusieurs étapes
successives à savoir (Gldel et Curbion, 1991) :
Le pré-enrichissement
Les 25 g de chair broyés de chaque poisson cible sont mélangé à 225 ml de milieu SFB
contenant 4 disques SFB. La suspension est ensuite incubée à 37°C pendant 24 heures.
Enrichissement
On introduit, aseptiquement, 1 ml de la solution de pré-enrichissement dans un tube à essai de
10ml SFB contenant 1 disque SFB. Puis, ils ont été incubés à 37°C pendant 24 heures.
Isolement
A partir du bouillon d’enrichissement, un ensemencement dans un milieu sélectif (gélose SS)
est réalisé. L’incubation est réalisée à 37 °C pendant 24 heures.
Les colonies suspectée apparaissent transparentes avec ou sans centre noir (coloration noir
due à la production de H2S). Une identification biochimique est entamée, par la suite, avec
une coloration de Gram (bacille Gram négatif), application d’un test d’oxydase (oxydase
positif) et enfin une identification bactérienne sur galerie Api 20E.
II.3.3. Confirmation biochimique et identification
II.3.3.1. Coloration de Gram
La coloration de Gram est la coloration de base de la bactériologie. C'est une coloration
double qui permet de différencier les bactéries non seulement d'après leur forme et leur
disposition, mais surtout d'après leur affinité pour les colorants liée à la structure de la paroi
(Lezzar et Abdelmalek, 2016).
Selon la norme (ISO 7218, 2007), le protocole est le suivant :
1. Préparer un frottis d’une culture bactérienne.
2. Recouvrir le frottis de violet de gentiane et laisser agir 1 minute ; rincer à l'eau
distillée