Chapitre II
Matériel et méthodes
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 N : nombre d’UFC par gramme ou par ml de produit initial.
 Σ : somme des colonies des boites interprétables.
 V : volume de solution déposé (1ml).
 n1 : nombre de boites considérées à la première dilution retenue.
 n2 : nombre de boites considérées à la seconde dilution retenue.
 d1 : facteur de la première dilution retenue.
II.3.2.2. Dénombrement des coliformes thermotolérants
La recherche des coliformes thermotolérants a été effectuée par la méthode NPP simple
concentration (ISO 9308-2 ; 2012). Plusieurs séries de 3 tubes de BLBVB ont été
ensemencés avec l’ajout de 1ml de la solution mère 10
-1 et ces dilutions (10
-2 , 10
-3 et 10
-4 ),
puis incubés à 44°C pendant 24h à 48h.
Un résultat positive est présenté par :
 Présence de trouble (développement bactérien)
 Production du gaz dans les cloches de durham (>1/10 de volume).
 Virage de couleur au jaune signifiant la fermentation du lactose (Milieu acide
réagissant avec l’indice coloré).
En se référant à la table de Mac Grady, le résultat est exprimé en NPP (Nombre le Plus
Probable). Le nombre de coliforme est calculé comme suit :
𝑵 =
𝑵𝑷𝑷
𝑽 𝒆𝒏𝒔𝒆𝒎𝒆𝒏𝒄é
× í µí±­í µí²… … … … . (2)
Avec :
 V ensemencé : volume ensemencé ;
 Fd : facteur de dilution ;
II.3.2.3. Dénombrement des Staphylococcus à coagulase positif
En bactériologie alimentaire, les Staphylococcus sont dénombrés le plus souvent sur le milieu
Chapman ou Baird-Parker (Marchal et al., 1991).
Le dénombrement a été effectué, par étalement de 0.1 ml de la solution mère et les dilutions
en surface de boite de Pétri contenant le milieu Chapman solidifié puis étalé par un râteau en
verre. Le dénombrement est effectué après 24 heures d’incubation à 37 °C.