Méthodes enzymatiques
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Figure 10.5 Réacteur à membrane. a. entrée, b. chambre de réaction, c. membrane semiperméable, d. sortie, e. agitateur.
transférer l’unité glycosyle sur un hydroxyle d’un autre sucre, donnant un disaccharide avec la même anomérie. Cette certitude est déjà un avantage considérable,
étant donné le prix généralement peu élevé des glycosidases et l’absence de protection. Ainsi, en présence d’a-galactosidase, on a la réaction (10.15).
(10.15)
Paranitrophényl a-D-galactopyranoside +
méthyl a-D-galactopyranoside -+
G a l a - ( 1-3)-Gal-a-OMe + NO, C, H, OH
Le rendement est de 28 % par rapport au glycoside donneur, ce qui est remarquable, car ce disaccharide important est difficilement accessible par d’autres
voies[24]. Toutefois, il faut utiliser un gros excès d’accepteur et la séparation du
produit est extrêmement laborieuse. Les rendements sont en général plus faibles
dans les autres conversions de ce type.
Une P-galactosidase de Bacillus circulans peut transférer un résidu P-D-galactopyranosyle du lactose sur la N-acétylglucosamine, selon (10.16) :
(10.16)
Gal-P-( 1-4)-Glc + GlcNAc + Gal-P-( 1-4)-GlcNAc + Glc
On a utilisé récemment cette enzyme très stable et très peu couteuse à une synthèse en continu de la N-acétyllactosamine dans un << réacteur membranaire ».
Dans ces réacteurs, une des parois de la chambre de réaction est semi-perméable
et retient l’enzyme, en laissant passer les produits (Fig. 10.5). Le mélange de réactifs en solution aqueuse arrive par a, reste un temps T au contact de l’enzyme, puis
est chassé vers l’extérieur en d par l’arrivée d’une nouvelle charge. Un problème
important de cette technologie est la détermination de la valeur optimum de T -
dans le cas présent pour limiter les hydrolyses parasites. Dans l’expérience décrite, une chambre de 10 mL, contenant 30 mg d’enzyme est traversée en 100 h par
2,6 L d’une solution de lactose (120 mM) et de N-acétylglucosamine (300 mM),
avec T égal à 0,25 h ou 0,5 h. On obtient 11,3 g de N-acétylla~tosamine[~~1. On
peut augmenter l’échelle sans diminuer le rendement.
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Figure 10.5 Réacteur à membrane. a. entrée, b. chambre de réaction, c. membrane semiperméable, d. sortie, e. agitateur.
transférer l’unité glycosyle sur un hydroxyle d’un autre sucre, donnant un disaccharide avec la même anomérie. Cette certitude est déjà un avantage considérable,
étant donné le prix généralement peu élevé des glycosidases et l’absence de protection. Ainsi, en présence d’a-galactosidase, on a la réaction (10.15).
(10.15)
Paranitrophényl a-D-galactopyranoside +
méthyl a-D-galactopyranoside -+
G a l a - ( 1-3)-Gal-a-OMe + NO, C, H, OH
Le rendement est de 28 % par rapport au glycoside donneur, ce qui est remarquable, car ce disaccharide important est difficilement accessible par d’autres
voies[24]. Toutefois, il faut utiliser un gros excès d’accepteur et la séparation du
produit est extrêmement laborieuse. Les rendements sont en général plus faibles
dans les autres conversions de ce type.
Une P-galactosidase de Bacillus circulans peut transférer un résidu P-D-galactopyranosyle du lactose sur la N-acétylglucosamine, selon (10.16) :
(10.16)
Gal-P-( 1-4)-Glc + GlcNAc + Gal-P-( 1-4)-GlcNAc + Glc
On a utilisé récemment cette enzyme très stable et très peu couteuse à une synthèse en continu de la N-acétyllactosamine dans un << réacteur membranaire ».
Dans ces réacteurs, une des parois de la chambre de réaction est semi-perméable
et retient l’enzyme, en laissant passer les produits (Fig. 10.5). Le mélange de réactifs en solution aqueuse arrive par a, reste un temps T au contact de l’enzyme, puis
est chassé vers l’extérieur en d par l’arrivée d’une nouvelle charge. Un problème
important de cette technologie est la détermination de la valeur optimum de T -
dans le cas présent pour limiter les hydrolyses parasites. Dans l’expérience décrite, une chambre de 10 mL, contenant 30 mg d’enzyme est traversée en 100 h par
2,6 L d’une solution de lactose (120 mM) et de N-acétylglucosamine (300 mM),
avec T égal à 0,25 h ou 0,5 h. On obtient 11,3 g de N-acétylla~tosamine[~~1. On
peut augmenter l’échelle sans diminuer le rendement.