Méthodes enzymatiques
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10.4.2 Généralisation
Le paragraphe précédent nous a permis de voir les données essentielles des
couplages avec les transférases.
a) L‘activation de la position anomérique du monosaccharide résulte de son
estérification par un groupement phosphate d’un nucléotide. Sept nucléotides
sucres sont fréquents chez les mammifères : UDP Glc, UDP Gal, UDP GlcNAc,
UDP GlcUA (uridine - diphosphate - acide glucuronique), GDPMan (guanosinediphosphate-mannose), GDPFuc (guanosine-diphosphate-fucose), CMP NeuAc
(cytidine monophosphate acide N-acétylneuraminique). Les nucléotides-sucres
sont très coûteux et il faut tâcher de mettre au point un cycle de régénération.
b) La réaction est catalysée par une glycosyl transférase. Celle-ci a une double
spécificité : elle fonctionne avec un nucléotide sucre particulier et elle le transfère sur une position déterminée d’un sucre particulier.
c) Pour cette raison, le couplage enzymatique est un couplage sans protections.
La simplicité des opérations permet de travailler à une échelle beaucoup plus élevée que dans les méthodes sans enzymes.
d) Dans le cas où le couplage est essayé sur l’unité terminale non réductrice
d’une chaîne d’oligosaccharide, la nature de cette chaîne, même à distance, peut
modifier l’efficacité de l’enzyme. Nous avons vu que la vitesse de glycosidation
est nulle sur une des branches du tetrasaccharide 10.49. Inversement, elle est
5 fois plus grande sur le chitobiose, GlcNAc -p- (I-4)-GlcNAc que sur GlcNAc.
En plus de la galactosyl transférase du colostrum, sept autres transférases ont
été clonées et peuvent donc être obtenues à partir de cellules en culture. Le coût
de ces enzymes restera sans doute pour un certain temps assez élevé, reflétant la
longueur de la mise au point du clonage. En fait, on peut réaliser des synthèses
efficaces avec des préparations enzymatiques partiellement purifiées extraites
d’organes de mammifère (foie, rein, cerveau) achetés dans une boucherie.
Fucosyl transférases
Elles utilisent GDPFuc, 10.51, qui a la réputation de n’être pas très commodément accessible par aucune méthode. On a
une fucosylation avec régénération calquée sur une des voies de biosynthèse du fucose, selon la suite de
réactions (10.14), dont l’analogie avec la suite de réactions (10.8) à (10.1 1)
OH
OH
1 0 . 5 1
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10.4.2 Généralisation
Le paragraphe précédent nous a permis de voir les données essentielles des
couplages avec les transférases.
a) L‘activation de la position anomérique du monosaccharide résulte de son
estérification par un groupement phosphate d’un nucléotide. Sept nucléotides
sucres sont fréquents chez les mammifères : UDP Glc, UDP Gal, UDP GlcNAc,
UDP GlcUA (uridine - diphosphate - acide glucuronique), GDPMan (guanosinediphosphate-mannose), GDPFuc (guanosine-diphosphate-fucose), CMP NeuAc
(cytidine monophosphate acide N-acétylneuraminique). Les nucléotides-sucres
sont très coûteux et il faut tâcher de mettre au point un cycle de régénération.
b) La réaction est catalysée par une glycosyl transférase. Celle-ci a une double
spécificité : elle fonctionne avec un nucléotide sucre particulier et elle le transfère sur une position déterminée d’un sucre particulier.
c) Pour cette raison, le couplage enzymatique est un couplage sans protections.
La simplicité des opérations permet de travailler à une échelle beaucoup plus élevée que dans les méthodes sans enzymes.
d) Dans le cas où le couplage est essayé sur l’unité terminale non réductrice
d’une chaîne d’oligosaccharide, la nature de cette chaîne, même à distance, peut
modifier l’efficacité de l’enzyme. Nous avons vu que la vitesse de glycosidation
est nulle sur une des branches du tetrasaccharide 10.49. Inversement, elle est
5 fois plus grande sur le chitobiose, GlcNAc -p- (I-4)-GlcNAc que sur GlcNAc.
En plus de la galactosyl transférase du colostrum, sept autres transférases ont
été clonées et peuvent donc être obtenues à partir de cellules en culture. Le coût
de ces enzymes restera sans doute pour un certain temps assez élevé, reflétant la
longueur de la mise au point du clonage. En fait, on peut réaliser des synthèses
efficaces avec des préparations enzymatiques partiellement purifiées extraites
d’organes de mammifère (foie, rein, cerveau) achetés dans une boucherie.
Fucosyl transférases
Elles utilisent GDPFuc, 10.51, qui a la réputation de n’être pas très commodément accessible par aucune méthode. On a
une fucosylation avec régénération calquée sur une des voies de biosynthèse du fucose, selon la suite de
réactions (10.14), dont l’analogie avec la suite de réactions (10.8) à (10.1 1)
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