172
Transformations chimiques et synthèse des oligosaccharides
+ E-NH,
Sépharose
I + E-NH2
Figure 10.4 Mécanisme proposé pour l’immobilisation d’une enzyme E-NH, sur agarose
avec l’aide du bromure de cyanogène.
support est d’abord activé avec du bromure de cyanogène. La figure 10.4 donne
le mécanisme de l’activation d’un système cis-diol et de son couplage sur l’enzyme symbolisée par E-NH, par l’intermédiaire de ses fonctions amines. Les couplages impliquent probablement la formation d’isoürées ou d’imidocarbonates.
L‘activité enzymatique est dès lors solidaire d’un gel insoluble. On mélange dans
le réacteur les cinq gels, qu’il faut maintenir en suspension par agitation, et, une
fois la réaction terminée, on récupère par filtration le mélange de gels enzymatiques, utilisable à une nouvelle galactosylation. On préparera finalement 10 g de
disaccharide et l’extension à 100 g ou plus poserait peu de problèmes.
Ce système a permis la galactosylation d’un grand nombre de dérivés de la
N-acétylglucosamine. Quand le substrat est le tétrasaccharide ramifié 10.49 qui
comporte deux résidus N-acétylglycosaminyl galactosylables, le couplage a lieu
exclusivement sur l’une des branches, pour donner 10.50.
GlcNAcQ -( 1-6)
1
t
Gal-p -( 1 -4)-Glc
10.48
10.49
Gal$ -( 1 -4)-GlcNAcQ -( 1-6)
1
t
Gal-p -( 1 -4)-Glc
GlcNAcp -( 1-3)
10.50
Transformations chimiques et synthèse des oligosaccharides
+ E-NH,
Sépharose
I + E-NH2
Figure 10.4 Mécanisme proposé pour l’immobilisation d’une enzyme E-NH, sur agarose
avec l’aide du bromure de cyanogène.
support est d’abord activé avec du bromure de cyanogène. La figure 10.4 donne
le mécanisme de l’activation d’un système cis-diol et de son couplage sur l’enzyme symbolisée par E-NH, par l’intermédiaire de ses fonctions amines. Les couplages impliquent probablement la formation d’isoürées ou d’imidocarbonates.
L‘activité enzymatique est dès lors solidaire d’un gel insoluble. On mélange dans
le réacteur les cinq gels, qu’il faut maintenir en suspension par agitation, et, une
fois la réaction terminée, on récupère par filtration le mélange de gels enzymatiques, utilisable à une nouvelle galactosylation. On préparera finalement 10 g de
disaccharide et l’extension à 100 g ou plus poserait peu de problèmes.
Ce système a permis la galactosylation d’un grand nombre de dérivés de la
N-acétylglucosamine. Quand le substrat est le tétrasaccharide ramifié 10.49 qui
comporte deux résidus N-acétylglycosaminyl galactosylables, le couplage a lieu
exclusivement sur l’une des branches, pour donner 10.50.
GlcNAcQ -( 1-6)
1
t
Gal-p -( 1 -4)-Glc
10.48
10.49
Gal$ -( 1 -4)-GlcNAcQ -( 1-6)
1
t
Gal-p -( 1 -4)-Glc
GlcNAcp -( 1-3)
10.50