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Les oligosaccharides : Configuration et analyse
9.3.3 Analyse par méthylation
L‘idée est d’éthérifier tous les hydroxyles libres. Comme les fonctions éthers
résistent aux conditions de l’hydrolyse acide, on ne retrouve dans les morceaux,
comme fonction hydroxylée libre, que celles qui étaient primitivement engagées
dans la liaison glycosidique et celle de l’extrémité réductrice de l’oligosaccharide. Sur un exemple simple, le lactose 9.5, perméthylé en 9.6, on voit que I’hydrolyse acide de 9.6 donnera un galactose tétraméthylé 9.7 et un glucose triméthylé 9.8, ce qui fixe l’agencement des deux résidus dans le disaccharide. Cette
idée banale se heurte à quelques difficultés dans la mise en œuvre : il faut un solvant à propriétés contradictoires, puisque le système est très hydrophile au départ
et très hydrophobe à l’arrivée. Dans un oligosaccharide assez important, il faut
créer une grande quantité de fonctions alcoolate à charge négative et proches les
unes des autres. Le solvant actuellement préféré est le diméthylsulfoxyde,
CH,SOCH,, et, comme base, on utilise l’anion correspondant, obtenu en ajoutant
au diméthylsulfoxyde de l’hydrure de sodium ou du ter-butylate de potassium.
Pour pouvoir établir un diagnostic sûr, il est essentiel que la conversion des
hydroxyles en alcoolates soit complète. On vérifie qu’on a bien un excès de
CH,SOCH, en utilisant la couleur rouge que donne cet anion avec le triphénylméthane. Cette méthode méthyle aussi les azotes amidiques des hexosamines Nacétylées.
Les méthodes que nous avons esquissées dans ces trois derniers paragraphes
donnent finalement un mélange de monosaccharides ou de dérivés de monosaccharides à analyser. On pratique cette analyse par les méthodes chromatographiques décrites aux chapitre 1 et 3, avec éventuellement une transformation
appropriée pour rendre les molécules volatiles. Le couplage chromatographie de
vapeur-spectrométrie de masse est particulièrement utile. On a miniaturisé les
opérations chimiques pour pouvoir traiter de très petites quantités d’échantillon.
R
RO ho- CH,OR
OR
RO
RO
9 . 5 R=H
9 . 6 R=Me
Me&oH
”
*
OH
Me
Me0
Me0
9 . 7
9 . 8
Les oligosaccharides : Configuration et analyse
9.3.3 Analyse par méthylation
L‘idée est d’éthérifier tous les hydroxyles libres. Comme les fonctions éthers
résistent aux conditions de l’hydrolyse acide, on ne retrouve dans les morceaux,
comme fonction hydroxylée libre, que celles qui étaient primitivement engagées
dans la liaison glycosidique et celle de l’extrémité réductrice de l’oligosaccharide. Sur un exemple simple, le lactose 9.5, perméthylé en 9.6, on voit que I’hydrolyse acide de 9.6 donnera un galactose tétraméthylé 9.7 et un glucose triméthylé 9.8, ce qui fixe l’agencement des deux résidus dans le disaccharide. Cette
idée banale se heurte à quelques difficultés dans la mise en œuvre : il faut un solvant à propriétés contradictoires, puisque le système est très hydrophile au départ
et très hydrophobe à l’arrivée. Dans un oligosaccharide assez important, il faut
créer une grande quantité de fonctions alcoolate à charge négative et proches les
unes des autres. Le solvant actuellement préféré est le diméthylsulfoxyde,
CH,SOCH,, et, comme base, on utilise l’anion correspondant, obtenu en ajoutant
au diméthylsulfoxyde de l’hydrure de sodium ou du ter-butylate de potassium.
Pour pouvoir établir un diagnostic sûr, il est essentiel que la conversion des
hydroxyles en alcoolates soit complète. On vérifie qu’on a bien un excès de
CH,SOCH, en utilisant la couleur rouge que donne cet anion avec le triphénylméthane. Cette méthode méthyle aussi les azotes amidiques des hexosamines Nacétylées.
Les méthodes que nous avons esquissées dans ces trois derniers paragraphes
donnent finalement un mélange de monosaccharides ou de dérivés de monosaccharides à analyser. On pratique cette analyse par les méthodes chromatographiques décrites aux chapitre 1 et 3, avec éventuellement une transformation
appropriée pour rendre les molécules volatiles. Le couplage chromatographie de
vapeur-spectrométrie de masse est particulièrement utile. On a miniaturisé les
opérations chimiques pour pouvoir traiter de très petites quantités d’échantillon.
R
RO ho- CH,OR
OR
RO
RO
9 . 5 R=H
9 . 6 R=Me
Me&oH
”
*
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9 . 7
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