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Toxicologie nucléaire environnementale et humaine
Mutation du gène HPRT. Le gène HPRT contrôle l’enzyme hypoxanthineguanine phosphoribosyltransferase (HPRT) qui catalyse la réaction de l’hypoxanthine et de la guanine avec la phosphoribosylpyrophosphate pour la récupération
des pui ines. En plus de son substrat normal, HPRT catalyse la conversion des
analogues de la puiine tels que la 6-thioguanine (6-TG), les rendant cytotoxiques pour les cellules normales. À la suite d’une mutation du gène, les cellules
déficientes en HPRT survivent au traitement par la 6-TG étant donné qu’elles ne
peuvent pas phosphoryler cet analogue. Les tests HPRT sont des tests de sélection
positive des mutations somatique de gène in vivo.
Des techniques issues de la biologie moléculaire sont également de plus en
plus mises en œuvre pour 1 étude des mutations, comme l’amplification aléatoire
ADN polymorphe par PCR (RAPD-PCR) et l’analyse des séquences répétées
en tandem (Verhofstad et al., 2008). La RAPD-PCR est basée sur l’amplification
e segments d ADN à 1 aide d’amorces définies de façon aléatoire. Les modifications génomiques diverses (mutations ponctuelles, réarrangements structurels,
e étions, insertions, etc.) sont susceptibles d’affecter l’hybridation des amorces
entraînant des pations d amplification différentielles. Cette méthode très rapide
a ete largement utilisée dans le domaine de l’écotoxicologie (De et al., 2004) et
pei-mettrait de détecter des mutations touchant 2 % de l’ADN (Jones et al., 2000).
e oit etre optimisée, notamment en termes de reproductibilité, pour une applion en routine au domaine des mutations chez des cellules humaines.
FSTtn S^™ces,d ADN répétées en tandem (microsatellites, minisatellites et
sont es régions du génome connues pour être instables et majoritairement
on co antes. Leur taux de mutations élevé en a fait un outil de choix pour l’étude
es événements mutagènes. L’ADN est digéré avec des enzymes de restriction,
. 1S a
é'ectroPhorèse puis hybridé à l’aide d’amorces spécifiques, ce qui
„
T raJments d ADN de différentes tailles (empreinte génétique). Une
démnnt a 10|n
Prd9uence de mutations des mini- et microsatellites a été
d’autreJnr C leZ h°mme (Dubrova et aL 2006; Weinberg et al., 2001) et chez
des radionrr TeS/1VantS (EUegren et al-> 1997 ; Tsyusko et al., 2007) exposés à
contaminâtC
contextes d’exposition chronique (faibles niveaux de
contamination interne ou d’irradiation externe).
Les approches « antiques »
découverts narT objecdp mdial de contribuer à élucider les fonctions des gènes
maintenant à
eXperiences de séquençage des génomes. Elles commencent
aussi dans l’analvs^
applicat’ons dans le domaine des biomarqueurs mais
nS ' analySe lntegrée des mécanismes d’action des xéniobiotiques.
es approches « omiques » sont réalisées à différents niveaux :
eu. des ARN messagers avec l’étude du transcriptome ;
protéomePrOté'neS eXprimées a Partir de ces ARN messagers avec l’étude du
- celui des métabolites avec l’étude du métabolome.
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Toxicologie nucléaire environnementale et humaine
Mutation du gène HPRT. Le gène HPRT contrôle l’enzyme hypoxanthineguanine phosphoribosyltransferase (HPRT) qui catalyse la réaction de l’hypoxanthine et de la guanine avec la phosphoribosylpyrophosphate pour la récupération
des pui ines. En plus de son substrat normal, HPRT catalyse la conversion des
analogues de la puiine tels que la 6-thioguanine (6-TG), les rendant cytotoxiques pour les cellules normales. À la suite d’une mutation du gène, les cellules
déficientes en HPRT survivent au traitement par la 6-TG étant donné qu’elles ne
peuvent pas phosphoryler cet analogue. Les tests HPRT sont des tests de sélection
positive des mutations somatique de gène in vivo.
Des techniques issues de la biologie moléculaire sont également de plus en
plus mises en œuvre pour 1 étude des mutations, comme l’amplification aléatoire
ADN polymorphe par PCR (RAPD-PCR) et l’analyse des séquences répétées
en tandem (Verhofstad et al., 2008). La RAPD-PCR est basée sur l’amplification
e segments d ADN à 1 aide d’amorces définies de façon aléatoire. Les modifications génomiques diverses (mutations ponctuelles, réarrangements structurels,
e étions, insertions, etc.) sont susceptibles d’affecter l’hybridation des amorces
entraînant des pations d amplification différentielles. Cette méthode très rapide
a ete largement utilisée dans le domaine de l’écotoxicologie (De et al., 2004) et
pei-mettrait de détecter des mutations touchant 2 % de l’ADN (Jones et al., 2000).
e oit etre optimisée, notamment en termes de reproductibilité, pour une applion en routine au domaine des mutations chez des cellules humaines.
FSTtn S^™ces,d ADN répétées en tandem (microsatellites, minisatellites et
sont es régions du génome connues pour être instables et majoritairement
on co antes. Leur taux de mutations élevé en a fait un outil de choix pour l’étude
es événements mutagènes. L’ADN est digéré avec des enzymes de restriction,
. 1S a
é'ectroPhorèse puis hybridé à l’aide d’amorces spécifiques, ce qui
„
T raJments d ADN de différentes tailles (empreinte génétique). Une
démnnt a 10|n
Prd9uence de mutations des mini- et microsatellites a été
d’autreJnr C leZ h°mme (Dubrova et aL 2006; Weinberg et al., 2001) et chez
des radionrr TeS/1VantS (EUegren et al-> 1997 ; Tsyusko et al., 2007) exposés à
contaminâtC
contextes d’exposition chronique (faibles niveaux de
contamination interne ou d’irradiation externe).
Les approches « antiques »
découverts narT objecdp mdial de contribuer à élucider les fonctions des gènes
maintenant à
eXperiences de séquençage des génomes. Elles commencent
aussi dans l’analvs^
applicat’ons dans le domaine des biomarqueurs mais
nS ' analySe lntegrée des mécanismes d’action des xéniobiotiques.
es approches « omiques » sont réalisées à différents niveaux :
eu. des ARN messagers avec l’étude du transcriptome ;
protéomePrOté'neS eXprimées a Partir de ces ARN messagers avec l’étude du
- celui des métabolites avec l’étude du métabolome.
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