Nouveaux outils de détection et d’ analyse
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L’objectif de ce chapitre est de fournir aux lecteurs un état des lieux et les bases
nécessaires pour comprendre les intérêts et les limitations de ces nouveaux outils.
Des applications de ces techniques dans le domaine de la toxicologie nucléaire
seront détaillées dans d’autres chapitres de cet ouvrage.
1,
Génotoxicité
On entend par génotoxicité les effets d’agents toxiques d’origine physique ou
chimique provoquant l’apparition de lésions au niveau de la molécule d’ADN. La
génotoxicité peut être évaluée par trois types de tests : les tests de mesure et de
caractérisation des lésions induites par le toxique, les tests d’activité de réparation
de ces lésions, et enfin les tests de mutagénicité.
1.1. Caractérisation des lésions : indications et limitations
1.1.1. Mesure des lésions
Les principales approches utilisées sont la méthode des comètes, les
chromatographiques, les méthodes basées sur des techniques e 10 ogi
laire et l’électrophorèse en champ pulsé de 1 ADN (tableau 1).
1.1.1.1. Méthode des comètes
La méthode des comètes {alkaline comet assay ou single cell bel e?
/
resis assay) permet, dans sa version classique, de mesurer sans i
j|ules
cassures simple brin, double-brin et les sites alcah-labi es ans
dénaturant
isolées (Singh et al., 1988). Les nucléoïdes sont soumis apres un a
à une électrophorèse en milieu alcalin. L’ADN comportant es c
’
dénaturation et la relaxation sont favorisées pai le p a ca in, p
.
l’anode alors que l’ADN intact qui est complexe, surenroule et volum1
migre pas. Après coloration par un fluorochrome, es nue eo
,-n_
Ceux qui comportent des cassures ont l’appaience une corne , ,
cassures
tensité de fluorescence de la queue étant proportionne es a a qu
ritère de
i présentes. L’ADN intact (la tête) garde l’apparence d une sphere. Le critère
1 mesure retenu est le pourcentage d’ADN dans la queue e a coi
j
La digestion de l’ADN, après l’étape de lyse, par des e"Z^'lieSJs eforXrra1des
| spécifiques (des ADN glycosylases bactériennes) perme
mesurées
? lésions de bases en cassures supplémentaires, qui peuvent alors etie: "^sure^
î (Collins et a!., 1993). On peut ainsi évaluer la quantité de pannes oxydees,
8 Pyrimidines oxydées, de dimères de pyrimidine.
î
La réalisation du test des comètes est relativement sin|îp1^
en cu]ture,
। sensible s’applique à n’importe quel type de cellu es iso ee .
.Qn de cette
’ à cellules provenant de tissus dissociés, prélèvements sai^gU’^ n
jations humaines
2 méthode est particulièrement recommandée pour e u e
biomonito9 ou animales exposées à des agents génotoxiques dans le domaine du
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L’objectif de ce chapitre est de fournir aux lecteurs un état des lieux et les bases
nécessaires pour comprendre les intérêts et les limitations de ces nouveaux outils.
Des applications de ces techniques dans le domaine de la toxicologie nucléaire
seront détaillées dans d’autres chapitres de cet ouvrage.
1,
Génotoxicité
On entend par génotoxicité les effets d’agents toxiques d’origine physique ou
chimique provoquant l’apparition de lésions au niveau de la molécule d’ADN. La
génotoxicité peut être évaluée par trois types de tests : les tests de mesure et de
caractérisation des lésions induites par le toxique, les tests d’activité de réparation
de ces lésions, et enfin les tests de mutagénicité.
1.1. Caractérisation des lésions : indications et limitations
1.1.1. Mesure des lésions
Les principales approches utilisées sont la méthode des comètes, les
chromatographiques, les méthodes basées sur des techniques e 10 ogi
laire et l’électrophorèse en champ pulsé de 1 ADN (tableau 1).
1.1.1.1. Méthode des comètes
La méthode des comètes {alkaline comet assay ou single cell bel e?
/
resis assay) permet, dans sa version classique, de mesurer sans i
j|ules
cassures simple brin, double-brin et les sites alcah-labi es ans
dénaturant
isolées (Singh et al., 1988). Les nucléoïdes sont soumis apres un a
à une électrophorèse en milieu alcalin. L’ADN comportant es c
’
dénaturation et la relaxation sont favorisées pai le p a ca in, p
.
l’anode alors que l’ADN intact qui est complexe, surenroule et volum1
migre pas. Après coloration par un fluorochrome, es nue eo
,-n_
Ceux qui comportent des cassures ont l’appaience une corne , ,
cassures
tensité de fluorescence de la queue étant proportionne es a a qu
ritère de
i présentes. L’ADN intact (la tête) garde l’apparence d une sphere. Le critère
1 mesure retenu est le pourcentage d’ADN dans la queue e a coi
j
La digestion de l’ADN, après l’étape de lyse, par des e"Z^'lieSJs eforXrra1des
| spécifiques (des ADN glycosylases bactériennes) perme
mesurées
? lésions de bases en cassures supplémentaires, qui peuvent alors etie: "^sure^
î (Collins et a!., 1993). On peut ainsi évaluer la quantité de pannes oxydees,
8 Pyrimidines oxydées, de dimères de pyrimidine.
î
La réalisation du test des comètes est relativement sin|îp1^
en cu]ture,
। sensible s’applique à n’importe quel type de cellu es iso ee .
.Qn de cette
’ à cellules provenant de tissus dissociés, prélèvements sai^gU’^ n
jations humaines
2 méthode est particulièrement recommandée pour e u e
biomonito9 ou animales exposées à des agents génotoxiques dans le domaine du