Tableau 1 ■ Les principales méthodes de mesure de la formation et de la réparation de lésions de l’ADN.
Méthode
Matériel biologiqu
initial
Quantité de matériel
biologique nécessaire
Sensibilité
Lésions mesurées
Méthode
quantitative
Commentaires
Immunodétection
Coupes de tissus,
cellules fixées,
ADN isolé
Quelques centaines
de cellules ou de qg
d’ADN
l/105à 1/106
bases
Lésions volumineuses
(CPDs, 64PPS,
adduits cisplatines,
benzoapyrenes) et
8-oxodGuo
Non sans
calibration
(généralement pas
réalisée)
Utilisation limitée par la faible
disponibilité commerciale des
anticorps
Immunodétection de
l’histone yH2AX
Cellules fixées
Quelques dizaines
de cellules
En théorie,
1 par cellule
(mesure
de foci)
Cassures double brin
Oui (avec réserves)
Mesure indirecte, calibration
délicate, mesurerait d’autres
évènements au niveau nucléaire
Méthode des
comètes
Cellules isolées
(cultures, sang,
tissus dissociés)
100-10 000 cellules
100 cassures/
cellule
Cassures et sites alcalilabiles, lésions coupées
par les enzymes de
réparation*
Non, calibration
possible pour les
cassures
Méthode très utilisée, idéale si peu
de matériel biologique et pour la
mesure de bases oxydées
qPCR, LMPCR
ADN isolé
0,5-l/104
Cassures et lésions
coupées par les
enzymes de réparation
Difficile à calibrer
Permet d’identifier les lésions au
niveau de séquences spécifiques ;
limitée par la complexité de la mise
en œuvre et le manque de sensibilité
CLHP-spectrométrie
de masse
ADN isolé, digéré
sous forme de
nucléosides
5-50 qg d’ADN
l/106-l/108
La plupart des bases
oxydées, tous types
de photoproduits,
adduits cisplatines,
benzoapyrènes,
Oui, si les
standards
(analogues
isotopiques) sont
disponibles
La plus spécifique, plus sensible
pour la quantification des lésions
créées par agents exogènes que pour
les dommages oxydants
* Enzymes de réparations disponibles les plus couramment utilisées et lésions reconnues : Fpg (formamidopyrimidine ADN glycosylases ; purines oxydées, sites
abasiques) ; hOGGl (human 8-oxoguanine ADN Glycosylase 1 ; 8-oxoGua ; FapyGua) ; Endo 111 (Endonucléase 111 ; pyrimidines oxydées, sites abasiques) ; T4
endo N/ (T'A endonucléase "V ; dimères de pyrimidine de type cyclobutane, sites abasiques
Toxicologie nucléaire environnementale et h u m a in e
Lavois/er — La photocopie non autorisée est un d&lit
Méthode
Matériel biologiqu
initial
Quantité de matériel
biologique nécessaire
Sensibilité
Lésions mesurées
Méthode
quantitative
Commentaires
Immunodétection
Coupes de tissus,
cellules fixées,
ADN isolé
Quelques centaines
de cellules ou de qg
d’ADN
l/105à 1/106
bases
Lésions volumineuses
(CPDs, 64PPS,
adduits cisplatines,
benzoapyrenes) et
8-oxodGuo
Non sans
calibration
(généralement pas
réalisée)
Utilisation limitée par la faible
disponibilité commerciale des
anticorps
Immunodétection de
l’histone yH2AX
Cellules fixées
Quelques dizaines
de cellules
En théorie,
1 par cellule
(mesure
de foci)
Cassures double brin
Oui (avec réserves)
Mesure indirecte, calibration
délicate, mesurerait d’autres
évènements au niveau nucléaire
Méthode des
comètes
Cellules isolées
(cultures, sang,
tissus dissociés)
100-10 000 cellules
100 cassures/
cellule
Cassures et sites alcalilabiles, lésions coupées
par les enzymes de
réparation*
Non, calibration
possible pour les
cassures
Méthode très utilisée, idéale si peu
de matériel biologique et pour la
mesure de bases oxydées
qPCR, LMPCR
ADN isolé
0,5-l/104
Cassures et lésions
coupées par les
enzymes de réparation
Difficile à calibrer
Permet d’identifier les lésions au
niveau de séquences spécifiques ;
limitée par la complexité de la mise
en œuvre et le manque de sensibilité
CLHP-spectrométrie
de masse
ADN isolé, digéré
sous forme de
nucléosides
5-50 qg d’ADN
l/106-l/108
La plupart des bases
oxydées, tous types
de photoproduits,
adduits cisplatines,
benzoapyrènes,
Oui, si les
standards
(analogues
isotopiques) sont
disponibles
La plus spécifique, plus sensible
pour la quantification des lésions
créées par agents exogènes que pour
les dommages oxydants
* Enzymes de réparations disponibles les plus couramment utilisées et lésions reconnues : Fpg (formamidopyrimidine ADN glycosylases ; purines oxydées, sites
abasiques) ; hOGGl (human 8-oxoguanine ADN Glycosylase 1 ; 8-oxoGua ; FapyGua) ; Endo 111 (Endonucléase 111 ; pyrimidines oxydées, sites abasiques) ; T4
endo N/ (T'A endonucléase "V ; dimères de pyrimidine de type cyclobutane, sites abasiques
Toxicologie nucléaire environnementale et h u m a in e