POLLUANTS ORGANIQUES
• Agiter 10 min (par exemple : dispositif mécanique).
• Centrifuger les extraits à 2000 x g pour éliminer les matières particulaires.
• Concentrer à sec la phase organique, successivement à l’aide de l’évaporateur rotatif, puis sous jet d’azote à 30 °C.
• Reprendre l’extrait sec par 0,2 ml d’hexane contenant les étalons internes
perdeutériés C16D10 et C24D50 (§ 4.4).
Cet extrait est prêt pour la purification.
5.2. PURIFICATION : ÉLIMINATION DES LIPIDES
La phase organique brute contient, en plus des hydrocarbures, de nombreux lipides que l’on élimine par chromatographie liquide sur colonne de
Florisil.
• Remplir la colonne de chromatographie d’adsorption (§ 3.1) de pentane
et y ajouter 10 g de Florisil préalablement activé (§ 4.2).
• Laver la colonne par 50 ml d’hexane.
• Déposer l’extrait hexanique (0,2 ml), complété à 2 ml par 1,8 ml d’hexane,
au sommet de la colonne.
• Eluer les hydrocarbures par 60 ml de pentane.
• Concentrer l’éluat à sec à l’aide d’un évaporateur rotatif, à 30 °C.
Cet extrait sec sera repris par 1 ml d’hexane pour le fractionnement
sur gel de silice (§ 5.3).
Toutes les étapes de mise à sec doivent être parfaitement contrôlées :
température, utilisation d’azote pur, obscurité.
5.3. FRACTIONNEMENT PAR CHROMATOGRAPHIE SUR GEL DE
SILICE
• Mélanger 15 ml de silice préalablement activée (§ 4.2) avec 25 ml de
dichlorométhane.
• Dégazer soigneusement, par agitation, le gel obtenu puis le transvaser
dans la colonne remplie de dichlorométhane.
• Laisser décanter le gel dans la colonne.
• Rincer soigneusement la colonne par 25 ml de dichlorométhane et
50 ml d’hexane.
• Introduire au-dessus du gel de silice 6 g de sulfate de sodium anhydre;
ce desséchant élimine l’eau résiduelle des extraits et conserve un degré
d'activité constant.
• Déposer à la surface du sulfate de sodium le millilitre d’extrait hexanique
purifié.
• Rincer soigneusement le récipient qui a contenu cet extrait par 2 x 0,5 ml
d hexane que 1 on ajoute à l'extrait déjà déposé.
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• Agiter 10 min (par exemple : dispositif mécanique).
• Centrifuger les extraits à 2000 x g pour éliminer les matières particulaires.
• Concentrer à sec la phase organique, successivement à l’aide de l’évaporateur rotatif, puis sous jet d’azote à 30 °C.
• Reprendre l’extrait sec par 0,2 ml d’hexane contenant les étalons internes
perdeutériés C16D10 et C24D50 (§ 4.4).
Cet extrait est prêt pour la purification.
5.2. PURIFICATION : ÉLIMINATION DES LIPIDES
La phase organique brute contient, en plus des hydrocarbures, de nombreux lipides que l’on élimine par chromatographie liquide sur colonne de
Florisil.
• Remplir la colonne de chromatographie d’adsorption (§ 3.1) de pentane
et y ajouter 10 g de Florisil préalablement activé (§ 4.2).
• Laver la colonne par 50 ml d’hexane.
• Déposer l’extrait hexanique (0,2 ml), complété à 2 ml par 1,8 ml d’hexane,
au sommet de la colonne.
• Eluer les hydrocarbures par 60 ml de pentane.
• Concentrer l’éluat à sec à l’aide d’un évaporateur rotatif, à 30 °C.
Cet extrait sec sera repris par 1 ml d’hexane pour le fractionnement
sur gel de silice (§ 5.3).
Toutes les étapes de mise à sec doivent être parfaitement contrôlées :
température, utilisation d’azote pur, obscurité.
5.3. FRACTIONNEMENT PAR CHROMATOGRAPHIE SUR GEL DE
SILICE
• Mélanger 15 ml de silice préalablement activée (§ 4.2) avec 25 ml de
dichlorométhane.
• Dégazer soigneusement, par agitation, le gel obtenu puis le transvaser
dans la colonne remplie de dichlorométhane.
• Laisser décanter le gel dans la colonne.
• Rincer soigneusement la colonne par 25 ml de dichlorométhane et
50 ml d’hexane.
• Introduire au-dessus du gel de silice 6 g de sulfate de sodium anhydre;
ce desséchant élimine l’eau résiduelle des extraits et conserve un degré
d'activité constant.
• Déposer à la surface du sulfate de sodium le millilitre d’extrait hexanique
purifié.
• Rincer soigneusement le récipient qui a contenu cet extrait par 2 x 0,5 ml
d hexane que 1 on ajoute à l'extrait déjà déposé.
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