HYDROCARBURES-CLHP-FLUORESCENCE (ORGANISMES)
l’on utilise un solvant apolaire comme l’éther de pétrole (Greffard et Meury,
1967) ou le pentane (Awad, 1979).
Ce dernier type d’extraction est retenu dans le mode opératoire proposé.
Son avantage essentiel réside dans la possibilité d’effectuer l’extraction de
l’échantillon et la purification de l’extrait en une seule opération grâce à
l’utilisation d’un solvant apolaire. En outre, grâce à l’utilisation d’échantillons secs, les concentrations sont directement exprimées par rapport au poids
de chair sèche, et non de chair humide, ce qui est plus significatif pour les
espèces à forte variation de la teneur en eau (coquillages).
1.2. PURIFICATION DES EXTRAITS
La purification des extraits lipidiques contenant les hydrocarbures a été
réalisée selon plusieurs auteurs par chromatographie d’adsorption liquide/
solide. Généralement l’adsorption est réalisée sur un mélange de silice et
d’alumine avec comme solvant d’élution le pentane (Blumer et al., 1971)
ou le mélange pentane/benzène (Farrington et al., 1972 ; Youngblood
et al., 1971 ; Ehrhardt, 1972). Brown et al. (1973) utilisent la silice seule et
Michel (1976) le Florisil. On considère que l’alumine et le Florisil sont de
bons adsorbants pour éliminer les lipides et que la silice peut être nécessaire
pour une partition entre hydrocarbures aliphatiques et aromatiques en fonction de la sélectivité du détecteur utilisé.
En fait, les techniques de purification doivent être adaptées cas par cas
à l’objectif recherché. Dans le cas présent, le détecteur fluorimétrique est
insensible aux hydrocarbures saturés ; de même, de faibles traces de lipides
résiduels ne gênent en rien l’analyse. On peut donc se satisfaire d'une préparation simplifiée qui serait tout à fait insuffisante par exemple pour une
analyse ultérieure en chromatographie gazeuse avec détecteur à ionisation
de flamme, ce dernier ne présentant aucune sélectivité propre.
Ces considérations ont permis la mise au point d’une procédure combinant extraction et purification de l’extrait en une seule opération en utilisant
un extracteur Soxhlet. L’échantillon s’y trouve placé au sommet d'une colonne
de Florisil. Les vapeurs de solvant se condensent en tête de colonne et permettent l’extraction des matières lipidiques. Puis les lipides restent fixés sur
le Florisil et seuls les hydrocarbures sont entraînés dans le ballon récepteur.
Après une simple concentration, ils sont directement utilisables pour 1 analyse.
1.3. ANALYSE CHROMATOGRAPHIQUE
La chromatographie liquide haute performance a souvent été associée
à la spectrofluorimétrie pour quantifier individuellement certains hydrocarbures aromatiques particuliers (Boden, 1976; Krstulovic et al., 1976,
Durand et Petroff, 1980). Cette technique donne surtout de bons résultats
dans certains cas favorables, comme par exemple l'analyse de résidus de
combustion pour lesquels un nombre restreint d'hydrocarbures polycycliques
non alkylés représente la plus grande part des hydrocarbures. Dans le cas
des rejets pétroliers directs, surtout après vieillissement, la part de ces hydrocarbures devient négligeable tandis que les polyaromatiques alkylés (plusieurs
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l’on utilise un solvant apolaire comme l’éther de pétrole (Greffard et Meury,
1967) ou le pentane (Awad, 1979).
Ce dernier type d’extraction est retenu dans le mode opératoire proposé.
Son avantage essentiel réside dans la possibilité d’effectuer l’extraction de
l’échantillon et la purification de l’extrait en une seule opération grâce à
l’utilisation d’un solvant apolaire. En outre, grâce à l’utilisation d’échantillons secs, les concentrations sont directement exprimées par rapport au poids
de chair sèche, et non de chair humide, ce qui est plus significatif pour les
espèces à forte variation de la teneur en eau (coquillages).
1.2. PURIFICATION DES EXTRAITS
La purification des extraits lipidiques contenant les hydrocarbures a été
réalisée selon plusieurs auteurs par chromatographie d’adsorption liquide/
solide. Généralement l’adsorption est réalisée sur un mélange de silice et
d’alumine avec comme solvant d’élution le pentane (Blumer et al., 1971)
ou le mélange pentane/benzène (Farrington et al., 1972 ; Youngblood
et al., 1971 ; Ehrhardt, 1972). Brown et al. (1973) utilisent la silice seule et
Michel (1976) le Florisil. On considère que l’alumine et le Florisil sont de
bons adsorbants pour éliminer les lipides et que la silice peut être nécessaire
pour une partition entre hydrocarbures aliphatiques et aromatiques en fonction de la sélectivité du détecteur utilisé.
En fait, les techniques de purification doivent être adaptées cas par cas
à l’objectif recherché. Dans le cas présent, le détecteur fluorimétrique est
insensible aux hydrocarbures saturés ; de même, de faibles traces de lipides
résiduels ne gênent en rien l’analyse. On peut donc se satisfaire d'une préparation simplifiée qui serait tout à fait insuffisante par exemple pour une
analyse ultérieure en chromatographie gazeuse avec détecteur à ionisation
de flamme, ce dernier ne présentant aucune sélectivité propre.
Ces considérations ont permis la mise au point d’une procédure combinant extraction et purification de l’extrait en une seule opération en utilisant
un extracteur Soxhlet. L’échantillon s’y trouve placé au sommet d'une colonne
de Florisil. Les vapeurs de solvant se condensent en tête de colonne et permettent l’extraction des matières lipidiques. Puis les lipides restent fixés sur
le Florisil et seuls les hydrocarbures sont entraînés dans le ballon récepteur.
Après une simple concentration, ils sont directement utilisables pour 1 analyse.
1.3. ANALYSE CHROMATOGRAPHIQUE
La chromatographie liquide haute performance a souvent été associée
à la spectrofluorimétrie pour quantifier individuellement certains hydrocarbures aromatiques particuliers (Boden, 1976; Krstulovic et al., 1976,
Durand et Petroff, 1980). Cette technique donne surtout de bons résultats
dans certains cas favorables, comme par exemple l'analyse de résidus de
combustion pour lesquels un nombre restreint d'hydrocarbures polycycliques
non alkylés représente la plus grande part des hydrocarbures. Dans le cas
des rejets pétroliers directs, surtout après vieillissement, la part de ces hydrocarbures devient négligeable tandis que les polyaromatiques alkylés (plusieurs
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