MATÉRIEL PARTICULAIRE
L’addition de MgCO3 avant la filtration est discutée au chapitre XV.
paragraphe 1.2. Elle n’apparaît pas toujours nécessaire d’après les essais
comparatifs effectués sur des échantillons marins : ils n’ont jamais montré
de différences remarquables, avec ou sans MgCO3, dans les déterminations
de chlorophylle a et des phéopigments (Neveux, non publié). Cependant,
chez certaines cultures de diatomées comme Chaetoceros affinis, des taux
relativement élevés en phéopigments ont parfois été observés qui ne peuvent
guère s’expliquer que par un artefact de dégradation lors de l’extraction.
Dans le cas d’une utilisation de MgCO3, les étalonnages (§ 7.4) doivent
être effectués avec des solutions acétoniques saturées en MgCO3.
• Filtrer sous vide léger (ne pas dépasser une dépression de 0,2 bar).
• Rincer la tulipe du support-filtre avec un peu d’eau de mer filtrée.
• Laisser fluer l’air quelques instants en fin de filtration.
7.2. EXTRACTION DES PIGMENTS
• Placer le filtre dans un tube contenant 6 ml d’acétone à 90 %.
• Broyer le filtre avec une baguette de verre à embout coupant permettant,
par mouvements de rotation et déplacements verticaux, de dilacérer le
filtre et d’homogénéiser l’extrait.
• Laisser l’extraction se poursuivre 1 à 2 h à l’obscurité et au réfrigérateur.
• Laisser revenir à la température du laboratoire (à l’obscurité).
• Agiter le tube pour homogénéiser l’extrait.
• Centrifuger à 4000-5000 tr.min-1 pendant 5 min sur un appareil à
rotor libre.
7.3. MESURE DE LA FLUORESCENCE
• Allumer l'appareil et la lampe une heure avant les mesures.
• Régler le zéro de l’appareil avec un tube témoin contenant un filtre
vierge ayant subi les mêmes traitements que les échantillons, excepté la
filtration du plancton.
• Mesurer la fluorescence Fo des tubes échantillons.
• Ajouter deux gouttes d’HCl 1 mol.l-1, attendre 1 min puis lire la fluorescence F . *
Remarque : Afin d’éviter que le filtre centrifugé au fond du tube apparaisse
au niveau des tentes du porte-échantillon et gêne les mesures, la plaque basale de la
porte standard du fluorimètre turner 111 a été enlevée, la lamelle-ressort suffisant
à maintenir le tube en position.
7.4. ÉTALONNAGE DU FLUORIMÈTRE
Cet étalonnage peut être effectué à partir de cultures d’algues (ex. : Diatomées ou Chrysophycées) en phase exponentielle de croissance. Cette solution est la moins conseillée. On peut également utiliser la chlorophylle a du
commerce. Mais la meilleure solution est l’étalonnage à partir de chlorophylle a purifiée par chromatographie.
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L’addition de MgCO3 avant la filtration est discutée au chapitre XV.
paragraphe 1.2. Elle n’apparaît pas toujours nécessaire d’après les essais
comparatifs effectués sur des échantillons marins : ils n’ont jamais montré
de différences remarquables, avec ou sans MgCO3, dans les déterminations
de chlorophylle a et des phéopigments (Neveux, non publié). Cependant,
chez certaines cultures de diatomées comme Chaetoceros affinis, des taux
relativement élevés en phéopigments ont parfois été observés qui ne peuvent
guère s’expliquer que par un artefact de dégradation lors de l’extraction.
Dans le cas d’une utilisation de MgCO3, les étalonnages (§ 7.4) doivent
être effectués avec des solutions acétoniques saturées en MgCO3.
• Filtrer sous vide léger (ne pas dépasser une dépression de 0,2 bar).
• Rincer la tulipe du support-filtre avec un peu d’eau de mer filtrée.
• Laisser fluer l’air quelques instants en fin de filtration.
7.2. EXTRACTION DES PIGMENTS
• Placer le filtre dans un tube contenant 6 ml d’acétone à 90 %.
• Broyer le filtre avec une baguette de verre à embout coupant permettant,
par mouvements de rotation et déplacements verticaux, de dilacérer le
filtre et d’homogénéiser l’extrait.
• Laisser l’extraction se poursuivre 1 à 2 h à l’obscurité et au réfrigérateur.
• Laisser revenir à la température du laboratoire (à l’obscurité).
• Agiter le tube pour homogénéiser l’extrait.
• Centrifuger à 4000-5000 tr.min-1 pendant 5 min sur un appareil à
rotor libre.
7.3. MESURE DE LA FLUORESCENCE
• Allumer l'appareil et la lampe une heure avant les mesures.
• Régler le zéro de l’appareil avec un tube témoin contenant un filtre
vierge ayant subi les mêmes traitements que les échantillons, excepté la
filtration du plancton.
• Mesurer la fluorescence Fo des tubes échantillons.
• Ajouter deux gouttes d’HCl 1 mol.l-1, attendre 1 min puis lire la fluorescence F . *
Remarque : Afin d’éviter que le filtre centrifugé au fond du tube apparaisse
au niveau des tentes du porte-échantillon et gêne les mesures, la plaque basale de la
porte standard du fluorimètre turner 111 a été enlevée, la lamelle-ressort suffisant
à maintenir le tube en position.
7.4. ÉTALONNAGE DU FLUORIMÈTRE
Cet étalonnage peut être effectué à partir de cultures d’algues (ex. : Diatomées ou Chrysophycées) en phase exponentielle de croissance. Cette solution est la moins conseillée. On peut également utiliser la chlorophylle a du
commerce. Mais la meilleure solution est l’étalonnage à partir de chlorophylle a purifiée par chromatographie.
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