CHLOROPHYLLE - FLUORIMÉTRIE
5.4. CENTRIFUGEUSE
Se référer au chapitre XV, paragraphe 5.2.
Pour l’application du présent protocole il est pratique d’utiliser une
centrifugeuse avec un rotor libre 8x15 acceptant les tubes décrits au paragraphe 5.2.
5.5. FLUORIMÈTRE
L’appareil le plus largement utilisé est le fluorimètre turner, modèle 111,
équipé notamment de :
. Photomultiplicateur R 136,
. Lampe F4T5 (réf. 110-853),
. Filtre d’excitation (primaire) : Filtre coloré 430-450 nm.
. Filtre d’émission (secondaire) : Filtre coloré 650-680 nm.
. Filtre 10 % neutre, dont le rôle est de réduire l’intensité de fluorescence
atteignant le photomultiplicateur. Il s’utilise lorsque la réponse de l’appareil
est saturée à la plus faible sensibilité.
Actuellement il existe un modèle 10 turner designs qui présente une
sensibilité supérieure au précédent (photomultiplicateur R 446). Il possède
en outre un sélecteur de gamme automatique.
6. RÉACTIFS
Suspension de MgCO3 à 1 % :
Se référer au chapitre XV, paragraphe 6.1.
Solvant d’extraction : acétone à 90 % :
Se référer au chapitre XV, paragraphe 6.2.
Solution d’acide chlorhydrique 1 mol.l 1 :
Diluer 12 fois de l’acide chlorhydrique concentré (d x 1,18) dans de
l’eau distillée, soit 8,3 ml d’acide pour 100 ml de solution.
7. MODE OPÉRATOIRE
7.1. FILTRATION
La filtration est effectuée sur membranes filtrantes en fibre de verre
whatman GF/C de 47 mm de diamètre ou équivalentes. Elles ne doivent pas
libérer des produits fluorescents dans l’acétone, comme le font, par exemple,
les membranes sartorius.
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5.4. CENTRIFUGEUSE
Se référer au chapitre XV, paragraphe 5.2.
Pour l’application du présent protocole il est pratique d’utiliser une
centrifugeuse avec un rotor libre 8x15 acceptant les tubes décrits au paragraphe 5.2.
5.5. FLUORIMÈTRE
L’appareil le plus largement utilisé est le fluorimètre turner, modèle 111,
équipé notamment de :
. Photomultiplicateur R 136,
. Lampe F4T5 (réf. 110-853),
. Filtre d’excitation (primaire) : Filtre coloré 430-450 nm.
. Filtre d’émission (secondaire) : Filtre coloré 650-680 nm.
. Filtre 10 % neutre, dont le rôle est de réduire l’intensité de fluorescence
atteignant le photomultiplicateur. Il s’utilise lorsque la réponse de l’appareil
est saturée à la plus faible sensibilité.
Actuellement il existe un modèle 10 turner designs qui présente une
sensibilité supérieure au précédent (photomultiplicateur R 446). Il possède
en outre un sélecteur de gamme automatique.
6. RÉACTIFS
Suspension de MgCO3 à 1 % :
Se référer au chapitre XV, paragraphe 6.1.
Solvant d’extraction : acétone à 90 % :
Se référer au chapitre XV, paragraphe 6.2.
Solution d’acide chlorhydrique 1 mol.l 1 :
Diluer 12 fois de l’acide chlorhydrique concentré (d x 1,18) dans de
l’eau distillée, soit 8,3 ml d’acide pour 100 ml de solution.
7. MODE OPÉRATOIRE
7.1. FILTRATION
La filtration est effectuée sur membranes filtrantes en fibre de verre
whatman GF/C de 47 mm de diamètre ou équivalentes. Elles ne doivent pas
libérer des produits fluorescents dans l’acétone, comme le font, par exemple,
les membranes sartorius.
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