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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
4.3.2. L Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
La composition chimique et le mode d’action de la gélose cétrimide
bioMérieux’ ’ ' SA sont donnés dans le chapitre 8 précité (cf. paragraphe 4.2.1.).
L'utilisation de la gélose cétrimide pour la détection des Pseudomonas aeruginosa est recommandée :
- par l’industrie cosmétique européenne (1997) ;
-dans le projet de norme (en anglais) PR NF ISO 22717 (2004) pour la
recherche des Ps. aeruginosa dans les produits cosmétiques ; la gélose au cétrimide présentée sera sans doute déclarée conforme, information ne pouvant pas
encore figurer dans la fiche technique du fabricant puisqu’il ne s’agit que d’un
projet de norme.
4.3.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
Préparer l’échantillon du produit dans un bouillon Eugon LT 100 (cf. supra,
paragraphe 4.1.2.).
Filtrer un volume connu sur une membrane filtrante (0,45 pm de diamètre de
pores en général) et laver la membrane avec des volumes connus d’eau distillée
ou de diluant stérile.
Transférer la membrane dans un récipient stérile contenant un volume déterminé du bouillon précédent et incuber à 32,5 ± 2,5 °C pendant 20 à 72 heures
maximum.
Ensemencer par étalement 0,1 mL (par exemple) du bouillon Eugon LT 100 à
la surface d une gélose cétrimide.
Incuber les boîtes de Pétri à 32,5 ± 2,5 °C pendant 24 à 48 heures.
43.23. Lecture et interprétation du milieu
Les colonies pigmentées en vert pâle et présentant une fluorescence sous
rayonnement ultraviolet sont présomptives de Ps. aeruginosa. Elles doivent être
obligatoirement confirmées par des tests biochimiques.
43.2.4. Confirmation et dénombrement
C ompter les colonies typiques de Ps. aeruginosa, en vérifiant tout d’abord
qu’elles proviennent de souches pures de bacilles Gram-, mobiles.
Confirmer leur identification en réalisant sur celles-ci :
le test oxydase (cf. première partie, chapitre 5 « Milieux de culture et tests
biochimiques pour 1 identification bactérienne, paragraphe 1.3.) ;
un lest de croissance à 42 °C sur une gélose trypcase soja par exemple ;
un test de production de production des deux pigments caractéristiques sur
les géloses King A et King B.
Ps aeruginosa est oxydase+, se développe à 42 °C et fabrique en général de
la pyocyanine et de la pyoverdine (cf. deuxième partie, chapitre 8
* Pseudomonas et ex-Pseudomonas », tableaux 113 et 114).
non
autorisée est un délit
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
4.3.2. L Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
La composition chimique et le mode d’action de la gélose cétrimide
bioMérieux’ ’ ' SA sont donnés dans le chapitre 8 précité (cf. paragraphe 4.2.1.).
L'utilisation de la gélose cétrimide pour la détection des Pseudomonas aeruginosa est recommandée :
- par l’industrie cosmétique européenne (1997) ;
-dans le projet de norme (en anglais) PR NF ISO 22717 (2004) pour la
recherche des Ps. aeruginosa dans les produits cosmétiques ; la gélose au cétrimide présentée sera sans doute déclarée conforme, information ne pouvant pas
encore figurer dans la fiche technique du fabricant puisqu’il ne s’agit que d’un
projet de norme.
4.3.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
Préparer l’échantillon du produit dans un bouillon Eugon LT 100 (cf. supra,
paragraphe 4.1.2.).
Filtrer un volume connu sur une membrane filtrante (0,45 pm de diamètre de
pores en général) et laver la membrane avec des volumes connus d’eau distillée
ou de diluant stérile.
Transférer la membrane dans un récipient stérile contenant un volume déterminé du bouillon précédent et incuber à 32,5 ± 2,5 °C pendant 20 à 72 heures
maximum.
Ensemencer par étalement 0,1 mL (par exemple) du bouillon Eugon LT 100 à
la surface d une gélose cétrimide.
Incuber les boîtes de Pétri à 32,5 ± 2,5 °C pendant 24 à 48 heures.
43.23. Lecture et interprétation du milieu
Les colonies pigmentées en vert pâle et présentant une fluorescence sous
rayonnement ultraviolet sont présomptives de Ps. aeruginosa. Elles doivent être
obligatoirement confirmées par des tests biochimiques.
43.2.4. Confirmation et dénombrement
C ompter les colonies typiques de Ps. aeruginosa, en vérifiant tout d’abord
qu’elles proviennent de souches pures de bacilles Gram-, mobiles.
Confirmer leur identification en réalisant sur celles-ci :
le test oxydase (cf. première partie, chapitre 5 « Milieux de culture et tests
biochimiques pour 1 identification bactérienne, paragraphe 1.3.) ;
un lest de croissance à 42 °C sur une gélose trypcase soja par exemple ;
un test de production de production des deux pigments caractéristiques sur
les géloses King A et King B.
Ps aeruginosa est oxydase+, se développe à 42 °C et fabrique en général de
la pyocyanine et de la pyoverdine (cf. deuxième partie, chapitre 8
* Pseudomonas et ex-Pseudomonas », tableaux 113 et 114).
non
autorisée est un délit