422
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
42.3.2. Filtration sur membrane
Filtrer un volume adapté représentant 0,1 g du produit à examiner préparé en
bouillon Eugon LT 100 (par exemple) sur une membrane filtrante de diamètre de
pores inférieur ou égal à 0,45 pm, montée sur un appareil à filtration {cf. première partie, chapitre 2 « Matériel principal du laboratoire de microbiologie »,
paragraphe 3.3.).
Effectuer un rinçage de la membrane avec un diluant stérile de manière à obtenir une meilleure distribution des micro-organismes sur le filtre.
Transférer la membrane à la surface d'une boîte de Pétri (de 55 mm de diamètre) contenant un milieu gélosé.
Utiliser les mêmes milieux de culture que dans les deux techniques précédentes et incuber dans les mêmes conditions.
Compter le nombre de colonies qui se développent. Calculer le nombre de
micro-organismes par g ou par mL de produit à examiner.
4.3.
Micro-organismes spécifiques
4.3.1. Escherichia coli
Pour la présentation de ce germe : cf. deuxième partie, chapitre 5
« Enterobacteriaceae (entérobactéries) ». paragraphe 2.1.1.
La détection et le dénombrement des Escherichia coli dans les produits cosmétiques font l’objet de la nouvelle norme NF ISO 21150 (2006), mais ils ne
figurent pas dans les recommandations de l'industrie cosmétique européenne.
Leur recherche se fonde sur le milieu de Mac Conkey avec cristal violet et le
milieu EMB de Levine.
4.3.1.1. Gélose Mac Conkey bioMérieux® SA
► Composition chimique et mode d'action
La composition chimique et le mode d'action de ce milieu de culture sont donnes dans la deuxième partie, chapitre 5 « Enterobacteriaceae (entérobactéries) »,
paragraphe 4.2.2. Ce milieu de culture sera sans doute déclaré conforme à la
nonne, information ne pouvant pas encore figurer dans la fiche technique du
fabricant puisqu'elle vient d’être homologuée.
► Ensemencement et incubation du milieu
Après enrichissement sur le bouillon Eugon LT 100 (cf. supra, paragraphe
4.1.2.) pendant au moins 20 heures (et jusqu’à 72 heures) à 32,5 ± 2,5 °C, ensemencer en surface des géloses Mac Conkey au cristal violet par étalement de
0.1 mL (par exemple) de ce bouillon.
Incuber les boîtes à 32,5 ± 2,5 °C pendant 24 à 48 heures maximum.
non
autorisée est un
délit
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
42.3.2. Filtration sur membrane
Filtrer un volume adapté représentant 0,1 g du produit à examiner préparé en
bouillon Eugon LT 100 (par exemple) sur une membrane filtrante de diamètre de
pores inférieur ou égal à 0,45 pm, montée sur un appareil à filtration {cf. première partie, chapitre 2 « Matériel principal du laboratoire de microbiologie »,
paragraphe 3.3.).
Effectuer un rinçage de la membrane avec un diluant stérile de manière à obtenir une meilleure distribution des micro-organismes sur le filtre.
Transférer la membrane à la surface d'une boîte de Pétri (de 55 mm de diamètre) contenant un milieu gélosé.
Utiliser les mêmes milieux de culture que dans les deux techniques précédentes et incuber dans les mêmes conditions.
Compter le nombre de colonies qui se développent. Calculer le nombre de
micro-organismes par g ou par mL de produit à examiner.
4.3.
Micro-organismes spécifiques
4.3.1. Escherichia coli
Pour la présentation de ce germe : cf. deuxième partie, chapitre 5
« Enterobacteriaceae (entérobactéries) ». paragraphe 2.1.1.
La détection et le dénombrement des Escherichia coli dans les produits cosmétiques font l’objet de la nouvelle norme NF ISO 21150 (2006), mais ils ne
figurent pas dans les recommandations de l'industrie cosmétique européenne.
Leur recherche se fonde sur le milieu de Mac Conkey avec cristal violet et le
milieu EMB de Levine.
4.3.1.1. Gélose Mac Conkey bioMérieux® SA
► Composition chimique et mode d'action
La composition chimique et le mode d'action de ce milieu de culture sont donnes dans la deuxième partie, chapitre 5 « Enterobacteriaceae (entérobactéries) »,
paragraphe 4.2.2. Ce milieu de culture sera sans doute déclaré conforme à la
nonne, information ne pouvant pas encore figurer dans la fiche technique du
fabricant puisqu'elle vient d’être homologuée.
► Ensemencement et incubation du milieu
Après enrichissement sur le bouillon Eugon LT 100 (cf. supra, paragraphe
4.1.2.) pendant au moins 20 heures (et jusqu’à 72 heures) à 32,5 ± 2,5 °C, ensemencer en surface des géloses Mac Conkey au cristal violet par étalement de
0.1 mL (par exemple) de ce bouillon.
Incuber les boîtes à 32,5 ± 2,5 °C pendant 24 à 48 heures maximum.
non
autorisée est un
délit