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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
37 °C. Dans les mêmes conditions, les souches Staphylococcus aureus ATCC
25923 et Escherichia coli ATCC 25922 sont inhibées.
5.2.1.2. Milieu de Litsky
Le milieu de Litsky (Litsky et al., 1953), encore appelé bouillon de Litsky, est
utilisé comme milieu confirmatif du milieu de Rothe lors de la recherche et du
dénombrement des streptocoques fécaux (streptocoques du groupe D) dans les
eaux.
C’est le cas du bouillon de Litsky Bio-Rad recommandé dans la norme NT T
90-411 ( 1989) (annulée en 2005 et non remplacée), ainsi que dans la norme NF
EN ISO 7899-2 (2000).
► Composition chimique du milieu de culture
La formule type du bouillon de Litsky Bio-Rad en g/L d’eau distillée est :
Peptone................................................................................................... 20
Glucose...................................................................................................
5
Chlorure de sodium (NaCl)...................................................................
5
Phosphate monopotassique (KH?PO4)................................................
2,7
Phosphate bipotassique (K,HPO4)......................................................
2,7
Azoture de sodium (NaN3)...................................................................
0,3
Éthyl-violet............................................................................................. 0,4 mg
pH final 6,9 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 121 ± 1 °C pendant 10 minutes.
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté ; le préparer en tubes de 10 mL
suivant les indications du fabricant.
non
autorisée
est un délit
► Mode d'action du milieu
Lazoture de sodium est une substance dont l'action inhibitrice est renforcée
par l'éthyl-violet (cf. supra, paragraphe 5.2.LL). Ce colorant est inhibiteur de
bacilles sporulés et de cocci Gram+. Il colore le dépôt de certains streptocoques
du groupe D en violet (« pastille violette » ou « anneau violet » dans un tube de
culture à fond rond).
Le glucose est la source de carbone du milieu.
► Ensemencement et incubation du milieu
Dans la méthode du NPP. à partir de chaque tube positif sur le bouillon de
Rothe à double ou à simple concentration, prélever une anse bouclée et la repiquer dans un tube de bouillon de Litsky.
Incuber les tubes à 37 ± 1 °C pendant 24 à 48 heures.
Dans la méthode par tiltration sur membrane : cf. infra, paragraphe 5.2.2.2.
► Observations, interprétation et dénombrement
Les tubes présentant un trouble et/ou un dépôt parfois violet dans le tube (à
tond rond) sont positifs. Ils confirment la présence de streptocoques du groupe D. $
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
37 °C. Dans les mêmes conditions, les souches Staphylococcus aureus ATCC
25923 et Escherichia coli ATCC 25922 sont inhibées.
5.2.1.2. Milieu de Litsky
Le milieu de Litsky (Litsky et al., 1953), encore appelé bouillon de Litsky, est
utilisé comme milieu confirmatif du milieu de Rothe lors de la recherche et du
dénombrement des streptocoques fécaux (streptocoques du groupe D) dans les
eaux.
C’est le cas du bouillon de Litsky Bio-Rad recommandé dans la norme NT T
90-411 ( 1989) (annulée en 2005 et non remplacée), ainsi que dans la norme NF
EN ISO 7899-2 (2000).
► Composition chimique du milieu de culture
La formule type du bouillon de Litsky Bio-Rad en g/L d’eau distillée est :
Peptone................................................................................................... 20
Glucose...................................................................................................
5
Chlorure de sodium (NaCl)...................................................................
5
Phosphate monopotassique (KH?PO4)................................................
2,7
Phosphate bipotassique (K,HPO4)......................................................
2,7
Azoture de sodium (NaN3)...................................................................
0,3
Éthyl-violet............................................................................................. 0,4 mg
pH final 6,9 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 121 ± 1 °C pendant 10 minutes.
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté ; le préparer en tubes de 10 mL
suivant les indications du fabricant.
non
autorisée
est un délit
► Mode d'action du milieu
Lazoture de sodium est une substance dont l'action inhibitrice est renforcée
par l'éthyl-violet (cf. supra, paragraphe 5.2.LL). Ce colorant est inhibiteur de
bacilles sporulés et de cocci Gram+. Il colore le dépôt de certains streptocoques
du groupe D en violet (« pastille violette » ou « anneau violet » dans un tube de
culture à fond rond).
Le glucose est la source de carbone du milieu.
► Ensemencement et incubation du milieu
Dans la méthode du NPP. à partir de chaque tube positif sur le bouillon de
Rothe à double ou à simple concentration, prélever une anse bouclée et la repiquer dans un tube de bouillon de Litsky.
Incuber les tubes à 37 ± 1 °C pendant 24 à 48 heures.
Dans la méthode par tiltration sur membrane : cf. infra, paragraphe 5.2.2.2.
► Observations, interprétation et dénombrement
Les tubes présentant un trouble et/ou un dépôt parfois violet dans le tube (à
tond rond) sont positifs. Ils confirment la présence de streptocoques du groupe D. $