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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
6.2.23. Test à la lysostaphine
La lysostaphine est un mélange de trois enzymes lytiques fabriquées par une
souche de Staphylococcus simulons (ex-Staphylococcus staphylolyticusY, le
composant principal de la lysostaphine est une endopeptidase qui coupe de manière
spécifique les ponts penta-glycines du peptidoglycane de la paroi bactérienne.
Ce test de différentiation a été proposé en 1974 par Kloos et al. suivant un
protocole qui utilise une gélose Agar « P » ;
La composition chimique de ce milieu en g/L d’eau distillée est la suivante :
Peptone................................................................................................... 10
Extrait de levure...................................................................................
5
Chlorure de sodium ..............................................................................
5
Glucose...................................................................................................
1
Agar....................................................................................................... 15
pH non précisé (ajuster à 7,0)
Stérilisation à l’autoclave à 118 °C pendant 15 minutes
Ce milieu peut être remplacé par une gélose de Mueller-Hinton 2
bioMérieux SA (cf. supra, paragraphe 6.2.2.2.).
► Mode opératoire (d'après bioMérieux® SA )
Ensemencer par inondation la surface d'une gélose Agar « P » en boîte de
Pétri avec une suspension bactérienne d’environ 107 germes/mL. Laisser sécher
10 à 20 minutes à 36 ± 2 °C.
Déposer à la surface de la gélose une goutte de lysostaphine à 200 pg/mL.
Incuber de 35 à 37 °C pendant 18 à 24 heures.
Au niveau du dépôt effectué sur la gélose, la présence d’une zone de lyse
totale ou subtotale de la culture bactérienne indique que la souche est sensible à
l'enzyme : c'est le cas avec les staphylocoques.
L absence de zone de lyse indique que la souche est résistante : c'est le cas
avec les microcoques et ex-microcoques.
6.3.
Identification biochimique
Elle est proposée par microméthode sur deux galeries API spécifiques de ces ?
germes. La présentation générale des galeries API bioMérieux® SA est à consul- |
ter préalablement dans la première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation |
du matériel et des milieux de culture », paragraphe 4.3.2.
6.3.1. Api“ Staph bioMérieux SA
API Staph est un système standardisé, conçu dans les années 1980 permettant ;
d'identifier :
vingt espèces et sous-espèces de staphylocoques, dont quinze d'origine .
humaine et cinq d'origine animale ;
- des Micrococi us spp. et deux espèces de Kocuria.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
6.2.23. Test à la lysostaphine
La lysostaphine est un mélange de trois enzymes lytiques fabriquées par une
souche de Staphylococcus simulons (ex-Staphylococcus staphylolyticusY, le
composant principal de la lysostaphine est une endopeptidase qui coupe de manière
spécifique les ponts penta-glycines du peptidoglycane de la paroi bactérienne.
Ce test de différentiation a été proposé en 1974 par Kloos et al. suivant un
protocole qui utilise une gélose Agar « P » ;
La composition chimique de ce milieu en g/L d’eau distillée est la suivante :
Peptone................................................................................................... 10
Extrait de levure...................................................................................
5
Chlorure de sodium ..............................................................................
5
Glucose...................................................................................................
1
Agar....................................................................................................... 15
pH non précisé (ajuster à 7,0)
Stérilisation à l’autoclave à 118 °C pendant 15 minutes
Ce milieu peut être remplacé par une gélose de Mueller-Hinton 2
bioMérieux SA (cf. supra, paragraphe 6.2.2.2.).
► Mode opératoire (d'après bioMérieux® SA )
Ensemencer par inondation la surface d'une gélose Agar « P » en boîte de
Pétri avec une suspension bactérienne d’environ 107 germes/mL. Laisser sécher
10 à 20 minutes à 36 ± 2 °C.
Déposer à la surface de la gélose une goutte de lysostaphine à 200 pg/mL.
Incuber de 35 à 37 °C pendant 18 à 24 heures.
Au niveau du dépôt effectué sur la gélose, la présence d’une zone de lyse
totale ou subtotale de la culture bactérienne indique que la souche est sensible à
l'enzyme : c'est le cas avec les staphylocoques.
L absence de zone de lyse indique que la souche est résistante : c'est le cas
avec les microcoques et ex-microcoques.
6.3.
Identification biochimique
Elle est proposée par microméthode sur deux galeries API spécifiques de ces ?
germes. La présentation générale des galeries API bioMérieux® SA est à consul- |
ter préalablement dans la première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation |
du matériel et des milieux de culture », paragraphe 4.3.2.
6.3.1. Api“ Staph bioMérieux SA
API Staph est un système standardisé, conçu dans les années 1980 permettant ;
d'identifier :
vingt espèces et sous-espèces de staphylocoques, dont quinze d'origine .
humaine et cinq d'origine animale ;
- des Micrococi us spp. et deux espèces de Kocuria.