Staphylococcus, Micrococcus et ex-Micrococcus
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5.7.7. Composition chimique et mode d'action du milieu de culture
► Composition chimique
La composition type de ce milieu de culture en g/L d'eau purifiée est :
Peptone de caséine............................................................................... 10
Extrait de viande .................................................................................
5
Extrait de levure...................................................................................
5
Chlorure de lithium...............................................................................
5
D(-)-mannitol........................................................................................ 20
Chlorure de sodium............................................................................... 5
Glycine...................................................................................................
1,2
Pyruvate de sodium............................................................................... 3
Tween® 80..............................................................................................
'
Stérilisation à l’autoclave : 121 °C pendant 20 minutes
Après préparation du milieu en tubes (19 mL) et stérilisation, refroidir à moins
de 50 °C et ajouter 0,1 mL par tube d’une solution aqueuse à 1 % de tellurite de
potassium. Le pH final du milieu est de 6,9 ± 0,2 à 25 °C.
► Mode d’action
Le pyruvate de sodium, la glycine ainsi que la concentration élevée en mannitol, stimulent la croissance des staphylocoques. Le mannitol peut être utilise par
certaines espèces de staphylocoques (S. aureus...).
Le chlorure de lithium inhibe des bactéries à Gram- et le tellurite de potassium
des bactéries à Gram+ ; ce dernier est réduit en tellure métallique non par es
staphylocoques.
La culture sous huile de paraffine inhibe le développement des microcoques et
ex-microcoques aérobies stricts.
Le tween® 80 est un neutralisant d antiseptiques.
5.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Préparer l’échantillon d'aliment à analyser et les dilutions décimales en fryptone sel bioMérieux® SA (cf. première partie, chapitre 4 « Méthodes de travail en
microbiologie », paragraphe 3.1.).
Ensemencer les tubes de ce bouillon avec 1 mL des dilutions préparées et
recouvrir le milieu d'une couche d'huile de paraffine visqueuse.
Incuber à 37 °C pendant 18 à 24 heures.
Ensemencer en stries des boîtes de gélose de Baird-Parker ou de gélose de
Baird-Parker RPF (cf. infra, paragraphes 5.2.1. et 5.2.2.) a partir des cultures en
bouillon ayant noirci.
5.1.3. Lecture et interprétation du milieu
।
.
, ._ c'pvnrime oar une coloration noire du bouillon.
La croissance des staphylocoques s exprime ya * u
Pour un dénombrement par la méthode NPP. sont considérés comme positifs
les tubes de bouillon donnant une coagulase positive (
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5.7.7. Composition chimique et mode d'action du milieu de culture
► Composition chimique
La composition type de ce milieu de culture en g/L d'eau purifiée est :
Peptone de caséine............................................................................... 10
Extrait de viande .................................................................................
5
Extrait de levure...................................................................................
5
Chlorure de lithium...............................................................................
5
D(-)-mannitol........................................................................................ 20
Chlorure de sodium............................................................................... 5
Glycine...................................................................................................
1,2
Pyruvate de sodium............................................................................... 3
Tween® 80..............................................................................................
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Stérilisation à l’autoclave : 121 °C pendant 20 minutes
Après préparation du milieu en tubes (19 mL) et stérilisation, refroidir à moins
de 50 °C et ajouter 0,1 mL par tube d’une solution aqueuse à 1 % de tellurite de
potassium. Le pH final du milieu est de 6,9 ± 0,2 à 25 °C.
► Mode d’action
Le pyruvate de sodium, la glycine ainsi que la concentration élevée en mannitol, stimulent la croissance des staphylocoques. Le mannitol peut être utilise par
certaines espèces de staphylocoques (S. aureus...).
Le chlorure de lithium inhibe des bactéries à Gram- et le tellurite de potassium
des bactéries à Gram+ ; ce dernier est réduit en tellure métallique non par es
staphylocoques.
La culture sous huile de paraffine inhibe le développement des microcoques et
ex-microcoques aérobies stricts.
Le tween® 80 est un neutralisant d antiseptiques.
5.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Préparer l’échantillon d'aliment à analyser et les dilutions décimales en fryptone sel bioMérieux® SA (cf. première partie, chapitre 4 « Méthodes de travail en
microbiologie », paragraphe 3.1.).
Ensemencer les tubes de ce bouillon avec 1 mL des dilutions préparées et
recouvrir le milieu d'une couche d'huile de paraffine visqueuse.
Incuber à 37 °C pendant 18 à 24 heures.
Ensemencer en stries des boîtes de gélose de Baird-Parker ou de gélose de
Baird-Parker RPF (cf. infra, paragraphes 5.2.1. et 5.2.2.) a partir des cultures en
bouillon ayant noirci.
5.1.3. Lecture et interprétation du milieu
।
.
, ._ c'pvnrime oar une coloration noire du bouillon.
La croissance des staphylocoques s exprime ya * u
Pour un dénombrement par la méthode NPP. sont considérés comme positifs
les tubes de bouillon donnant une coagulase positive (