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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Incuber les boîtes à 36 ± 2 °C pendant 22 ± 2 heures, puis contrôler la pureté
des cultures obtenues.
► Confirmation du premier type de colonies
Confirmer leur identification en repiquant ces colonies sur un bouillon acétamide Bio-Rad, bouillon de confirmation pour la présence de Pseudomonas aeruginosa dans les mêmes types d’eaux que la gélose CN Agar, conformément à la
norme NF EN 12780 (2002).
La composition chimique (formule type) du bouillon acétamide qsp/L d’eau
distillée est :
Dihydrogénophosphate de potassium (KH2PO4)..........................
1
Sulfate de magnésium anhydre (MgSO4)............................................ 0,2
Acétamide............................................................................................... 2
Chlorure de sodium................................................................................ 0,2
Molybdate de sodium (NaMoO42FLO)................................................
0,005
Sulfate de fer (FeSO47H2O).................................................................
0,0005
pH final 7,0 ± 0,5 à 25 °C
Ce milieu est disponible en tubes de 5 mL prêts à l’emploi.
Incuber les tubes de bouillon acétamide à 36 ± 2 °C pendant 22 ± 2 heures.
Ajouter dans chaque tube une à deux gouttes de réactif de Nessler. L’apparition d'une coloration allant du jaune au rouge brique traduit la production
d'ammoniac et confirme la présence de Ps. aeruginosa.
► Confirmation du second type de colonies
Sur les cultures obtenues sur gélose nutritive, effectuer le test oxydase (cf. première partie, chapitre 5 « Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne », paragraphe 1.3.).
Puis, repiquer les cultures brun-rougeâtre oxydase positive sur :
- une gélose King B (cf. infra, paragraphe 5.1.) incubé à 36 ± 2 °C pendant 24
heures et jusqu'à 5 jours.
— un tube de bouillon acétamide incubé à 36 + 2 °C pendant 22 + 2 heures.
Après incubation, ajouter une à deux gouttes de réactif de Nessler.
loute culture provenant d'une colonie brun-rougeâtre oxydase+, fluorescente _
sous rayonnement ultraviolet et produisant de l’ammoniac à partir d acétamide î
doit être confirmée comme Ps. aeruginosa.
Pour le mode de calcul du nombre de Ps. aeruginosa dans l’eau à analyser, |
il convient de se reporter à l’expression des résultats de la norme NF EN 12780 ?
et à la législation du type d'eau analysée.
42.2.5. Contrôle de qualité du milieu
j
En contrôle de qualité de la gélose CN Agar, la souche de Pseudomonas aeru- j
ginosa A1C ( 9027 se développe sur ce milieu en produisant des colonies bleuveri (pyocianine) après 24 à 48 heures d’incubation à 37 °C. La souche Entero- I
coccus faecalis CCM 2541 ne se développe pas.
«
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Incuber les boîtes à 36 ± 2 °C pendant 22 ± 2 heures, puis contrôler la pureté
des cultures obtenues.
► Confirmation du premier type de colonies
Confirmer leur identification en repiquant ces colonies sur un bouillon acétamide Bio-Rad, bouillon de confirmation pour la présence de Pseudomonas aeruginosa dans les mêmes types d’eaux que la gélose CN Agar, conformément à la
norme NF EN 12780 (2002).
La composition chimique (formule type) du bouillon acétamide qsp/L d’eau
distillée est :
Dihydrogénophosphate de potassium (KH2PO4)..........................
1
Sulfate de magnésium anhydre (MgSO4)............................................ 0,2
Acétamide............................................................................................... 2
Chlorure de sodium................................................................................ 0,2
Molybdate de sodium (NaMoO42FLO)................................................
0,005
Sulfate de fer (FeSO47H2O).................................................................
0,0005
pH final 7,0 ± 0,5 à 25 °C
Ce milieu est disponible en tubes de 5 mL prêts à l’emploi.
Incuber les tubes de bouillon acétamide à 36 ± 2 °C pendant 22 ± 2 heures.
Ajouter dans chaque tube une à deux gouttes de réactif de Nessler. L’apparition d'une coloration allant du jaune au rouge brique traduit la production
d'ammoniac et confirme la présence de Ps. aeruginosa.
► Confirmation du second type de colonies
Sur les cultures obtenues sur gélose nutritive, effectuer le test oxydase (cf. première partie, chapitre 5 « Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne », paragraphe 1.3.).
Puis, repiquer les cultures brun-rougeâtre oxydase positive sur :
- une gélose King B (cf. infra, paragraphe 5.1.) incubé à 36 ± 2 °C pendant 24
heures et jusqu'à 5 jours.
— un tube de bouillon acétamide incubé à 36 + 2 °C pendant 22 + 2 heures.
Après incubation, ajouter une à deux gouttes de réactif de Nessler.
loute culture provenant d'une colonie brun-rougeâtre oxydase+, fluorescente _
sous rayonnement ultraviolet et produisant de l’ammoniac à partir d acétamide î
doit être confirmée comme Ps. aeruginosa.
Pour le mode de calcul du nombre de Ps. aeruginosa dans l’eau à analyser, |
il convient de se reporter à l’expression des résultats de la norme NF EN 12780 ?
et à la législation du type d'eau analysée.
42.2.5. Contrôle de qualité du milieu
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En contrôle de qualité de la gélose CN Agar, la souche de Pseudomonas aeru- j
ginosa A1C ( 9027 se développe sur ce milieu en produisant des colonies bleuveri (pyocianine) après 24 à 48 heures d’incubation à 37 °C. La souche Entero- I
coccus faecalis CCM 2541 ne se développe pas.
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