Pseudonionas et ex-Pseudomonas
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42.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
En bactériologie des eaux, filtrer 100 à 250 mL de l’eau à analyser en fonction
du type d’eau (eau destinée à la consommation humaine, eau de piscine chlorée...) et du paramètre microbiologique exigé par les législations européenne et
française.
Appliquer la membrane à la surface d’une gélose CN Agar en boîte de Pétri
(face quadrillée vers le haut).
Incuber les boîtes de milieu à 36 ± 2 °C pendant 44 ± 4 heures en atmosphère
humide (dans un récipient permettant d’éviter une perte d'humidité).
42.2.3. Lecture, interprétation du milieu et dénombrement
Examiner les membranes pour vérifier la croissance des colonies après
22 + 2 heures et 44 ± 4 heures.
Compter tout d’abord toutes les colonies produisant une pigmentation bleuvert comme Pseudomonas aeruginosa confirmés.
Puis, observer les membranes sous rayonnement ultraviolet et dénombrer :
- les colonies ne produisant pas de pyocianine, mais donnant une fluorescence
comme des Ps. aeruginosa présumés (premier type) ;
- les autres colonies produisant une coloration brun-rougeâtre et ne donnant
pas une fluorescence comme des Ps. aeruginosa présumés (second type).
Ces deux types de colonies doivent être confirmés (cf. infia, paragraphe
4.2.2.4.).
42.2.4. Confirmation et dénombrement
► Repiquage des colonies et contrôle de pin été
Prélever sur la membrane les colonies à confirmer et les ensemencer par isolement sur une gélose nutritive Bio-Rad pour le contrôle des eaux.
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture en g/L d'eau
distillée est :
Peptone....................
Extrait de viande . ..
Extrait de levures ..
Chlorure de sodium.
Agar..........................
5
1
2
5
15
pH final 7.4 ± 0.2 à 25 C
Ce milieu est disponible en boîtes de Pétri prêtes à remploi.
Ce milieu non sélectif dépourvu de L-cystéine est utilisé .
- pour la confirmation des Légionella spp. isolées à partir de différentes catégories d'eaux (cf. Delarras et Trébaol. 2003) conformément à la norme NF T 90431(2003);
- pour la confirmation et le dénombrement des Ps. aeruginosa dans les eaux
suivant la norme NF EN 12780 (2002).
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42.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
En bactériologie des eaux, filtrer 100 à 250 mL de l’eau à analyser en fonction
du type d’eau (eau destinée à la consommation humaine, eau de piscine chlorée...) et du paramètre microbiologique exigé par les législations européenne et
française.
Appliquer la membrane à la surface d’une gélose CN Agar en boîte de Pétri
(face quadrillée vers le haut).
Incuber les boîtes de milieu à 36 ± 2 °C pendant 44 ± 4 heures en atmosphère
humide (dans un récipient permettant d’éviter une perte d'humidité).
42.2.3. Lecture, interprétation du milieu et dénombrement
Examiner les membranes pour vérifier la croissance des colonies après
22 + 2 heures et 44 ± 4 heures.
Compter tout d’abord toutes les colonies produisant une pigmentation bleuvert comme Pseudomonas aeruginosa confirmés.
Puis, observer les membranes sous rayonnement ultraviolet et dénombrer :
- les colonies ne produisant pas de pyocianine, mais donnant une fluorescence
comme des Ps. aeruginosa présumés (premier type) ;
- les autres colonies produisant une coloration brun-rougeâtre et ne donnant
pas une fluorescence comme des Ps. aeruginosa présumés (second type).
Ces deux types de colonies doivent être confirmés (cf. infia, paragraphe
4.2.2.4.).
42.2.4. Confirmation et dénombrement
► Repiquage des colonies et contrôle de pin été
Prélever sur la membrane les colonies à confirmer et les ensemencer par isolement sur une gélose nutritive Bio-Rad pour le contrôle des eaux.
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture en g/L d'eau
distillée est :
Peptone....................
Extrait de viande . ..
Extrait de levures ..
Chlorure de sodium.
Agar..........................
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pH final 7.4 ± 0.2 à 25 C
Ce milieu est disponible en boîtes de Pétri prêtes à remploi.
Ce milieu non sélectif dépourvu de L-cystéine est utilisé .
- pour la confirmation des Légionella spp. isolées à partir de différentes catégories d'eaux (cf. Delarras et Trébaol. 2003) conformément à la norme NF T 90431(2003);
- pour la confirmation et le dénombrement des Ps. aeruginosa dans les eaux
suivant la norme NF EN 12780 (2002).