Listeria
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La galerie API Listeria est un système standardisé utilisant des tests miniaturisés qui permet d’identifier :
- l’espèce principale Listeria monocytogenes ;
- les cinq autres espèces Listeria grayi, L. innocua, L. ivanovii, L. seeligeri et
L. welshimeri.
Elle est composée de 10 microtubes (surmontés de cupules) contenant des
substrats déshydratés, qui permettent de réaliser 10 tests biochimiques de fermentations de sucres ou de recherches d’enzymes (cf. infra, tableau 101). Un
1 Ie test (hors galerie) utilise une gélose au sang de mouton pour déterminer une
hémolyse de type (3 présente chez certaines espèces de Listeria.
5.1.2.
Préparation, inoculation et incubation de la galerie
Vérifier que la souche à identifier possède les propriétés caractéristiques du
genre Listeria : bacilles courts à Gram+, polymorphes, mobiles à 25 °C mais pas
à 37 °C, catalase+ et oxydase- (cf. supra, tableau 98).
Préparer une subculture de cette souche sur une gélose au sang à partir d'une
colonie bien isolée.
Incuber la boîte à 36 ± 2 °C pendant 24 heures.
S’il y a présence d’une zone d’hémolyse autour des colonies, noter le type
d’hémolyse de cette souche.
► Recommandations du fabricant
Les colonies prélevées en vue de leur identification sur la galerie API Listeria
doivent provenir :
- de milieux gélosés au sang non sélectifs tels que la gélose Columbia, la
gélose trypease soja, avec ou sans antibiotiques (cf. première partie, chapitre 3
«Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture»,
paragraphe 4.1.) ;
- de milieux sélectifs pour Listeria à l’exception du milieu de Mc Bride qui
inhibe l’expression enzymatique des bactéries sur la galerie API Listeria (s il a
été utilisé pour l’isolement, faire une subculture sur gélose au sang).
À partir d’une culture jeune de la souche sur gélose au sang, prélever quelques
colonies bien isolées afin de réaliser une suspension d’opacité égale à I de Mac
Farland dans 2 mL d’eau déminéralisée (API Suspension Medium en ampoule de
2mL).
Ensemencer une galerie API Listeria en suivant le protocole du fabricant et en
respectant les deux conseils suivants :
- pour le test de différenciation L. innocua et L. monocytogenes (test DIM),
remplir le tube et sa cupule sans créer un ménisque convexe ;
- pour les tests esculine (ESC) à D-Tagatose (TAG), remplir uniquement la
Partie tube.
Incuber la galerie pendant 18 à 24 heures à 36 ± 2 °C en aérobiose.
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La galerie API Listeria est un système standardisé utilisant des tests miniaturisés qui permet d’identifier :
- l’espèce principale Listeria monocytogenes ;
- les cinq autres espèces Listeria grayi, L. innocua, L. ivanovii, L. seeligeri et
L. welshimeri.
Elle est composée de 10 microtubes (surmontés de cupules) contenant des
substrats déshydratés, qui permettent de réaliser 10 tests biochimiques de fermentations de sucres ou de recherches d’enzymes (cf. infra, tableau 101). Un
1 Ie test (hors galerie) utilise une gélose au sang de mouton pour déterminer une
hémolyse de type (3 présente chez certaines espèces de Listeria.
5.1.2.
Préparation, inoculation et incubation de la galerie
Vérifier que la souche à identifier possède les propriétés caractéristiques du
genre Listeria : bacilles courts à Gram+, polymorphes, mobiles à 25 °C mais pas
à 37 °C, catalase+ et oxydase- (cf. supra, tableau 98).
Préparer une subculture de cette souche sur une gélose au sang à partir d'une
colonie bien isolée.
Incuber la boîte à 36 ± 2 °C pendant 24 heures.
S’il y a présence d’une zone d’hémolyse autour des colonies, noter le type
d’hémolyse de cette souche.
► Recommandations du fabricant
Les colonies prélevées en vue de leur identification sur la galerie API Listeria
doivent provenir :
- de milieux gélosés au sang non sélectifs tels que la gélose Columbia, la
gélose trypease soja, avec ou sans antibiotiques (cf. première partie, chapitre 3
«Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture»,
paragraphe 4.1.) ;
- de milieux sélectifs pour Listeria à l’exception du milieu de Mc Bride qui
inhibe l’expression enzymatique des bactéries sur la galerie API Listeria (s il a
été utilisé pour l’isolement, faire une subculture sur gélose au sang).
À partir d’une culture jeune de la souche sur gélose au sang, prélever quelques
colonies bien isolées afin de réaliser une suspension d’opacité égale à I de Mac
Farland dans 2 mL d’eau déminéralisée (API Suspension Medium en ampoule de
2mL).
Ensemencer une galerie API Listeria en suivant le protocole du fabricant et en
respectant les deux conseils suivants :
- pour le test de différenciation L. innocua et L. monocytogenes (test DIM),
remplir le tube et sa cupule sans créer un ménisque convexe ;
- pour les tests esculine (ESC) à D-Tagatose (TAG), remplir uniquement la
Partie tube.
Incuber la galerie pendant 18 à 24 heures à 36 ± 2 °C en aérobiose.