286
Microbiologie pratique pour le laboratoire d'analyses ou de contrôle sanitaire
7.13.4 . Contrôle de qualité du milieu
Il est présenté dans le tableau 95 d’après la fiche technique du fabricant.
Tableau 95 ■ Contrôle de qualité du Fluorocult® E. coli O 157 : H7 agar (Merck KGaA).
Souches tests
Croissance
Couleur des
colonies
MUG
Sorbitol
Escherichia coli 0 157 :
H7 (427-36/89)
Bonne
à très bonne
« Incolore »'
-
-
Escherichia coli ATCC
25922
Assez bonne
à bonne
Jaune
+
+
Proteus mirabilis ATCC
14273
Bonne
à très bonne
Brun-noir
-
-
Shigella sonnei ATCC
11060
Bonne
à très bonne
« Incolore » *
+
-
Enterobacter aerogenes
ATCC 13048
Bonne
à très bonne
Jaune
-
+
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Bonne
à très bonne
Jaune à centre
noir
-
+
Enterococcus faecalis
ATCC 19433
Aucune
1. Traduit de « colorless » d’après la fiche technique Merck KgaA, alors que ces colonies sont verdâtres.
7.2. Identification des Salmonella par polymerase chain reaction
Cf. Annexe générale 1, « Lexique de microbiologie » pour la définition de la
polymerase chain reaction (PCR).
En microbiologie des aliments, la norme NF EN ISO 22174 (2005) se rapporte
à la « réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche de micro-organismes pathogènes dans les aliments. Exigences générales et définitions ».
7.2.1. Principe
« Le kit iQ-Check™ Salmonella (Bio-Rad) utilise le principe d’amplification
par PC R d une séquence d ADN spécifique des salmonelles. Les séquences
amplifiées sont détectées en temps réel par des sondes spécifiques fluorescentes
(molecular beacon). En présence de la séquence cible dans l’échantillon, la fluorescence augmente à chaque cycle de la réaction et est détectée par le système =
iC scier iQ ». Cette méthode validée Afnor permet la détection des salmonelles =
en 24 heures dans les produits alimentaires et de l’environnement.
7.2.2. Protocole
Préparer la suspension mère en mettant 25 g d’aliments dans 225 mL d’eau j
peptonée tamponnée (cf. première partie, chapitre 4 « Méthodes de travail en ;
microbiologie ». paragraphe 3.1.1.2.).
Incuber à 37 °C pendant 21 ± 1 heures.
Réaliser la PCR suivant la méthode indiquée par le fabricant. Les résultats sont i
obtenus moins de heures après l'enrichissement en eau peptonée tamponée.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d'analyses ou de contrôle sanitaire
7.13.4 . Contrôle de qualité du milieu
Il est présenté dans le tableau 95 d’après la fiche technique du fabricant.
Tableau 95 ■ Contrôle de qualité du Fluorocult® E. coli O 157 : H7 agar (Merck KGaA).
Souches tests
Croissance
Couleur des
colonies
MUG
Sorbitol
Escherichia coli 0 157 :
H7 (427-36/89)
Bonne
à très bonne
« Incolore »'
-
-
Escherichia coli ATCC
25922
Assez bonne
à bonne
Jaune
+
+
Proteus mirabilis ATCC
14273
Bonne
à très bonne
Brun-noir
-
-
Shigella sonnei ATCC
11060
Bonne
à très bonne
« Incolore » *
+
-
Enterobacter aerogenes
ATCC 13048
Bonne
à très bonne
Jaune
-
+
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Bonne
à très bonne
Jaune à centre
noir
-
+
Enterococcus faecalis
ATCC 19433
Aucune
1. Traduit de « colorless » d’après la fiche technique Merck KgaA, alors que ces colonies sont verdâtres.
7.2. Identification des Salmonella par polymerase chain reaction
Cf. Annexe générale 1, « Lexique de microbiologie » pour la définition de la
polymerase chain reaction (PCR).
En microbiologie des aliments, la norme NF EN ISO 22174 (2005) se rapporte
à la « réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la recherche de micro-organismes pathogènes dans les aliments. Exigences générales et définitions ».
7.2.1. Principe
« Le kit iQ-Check™ Salmonella (Bio-Rad) utilise le principe d’amplification
par PC R d une séquence d ADN spécifique des salmonelles. Les séquences
amplifiées sont détectées en temps réel par des sondes spécifiques fluorescentes
(molecular beacon). En présence de la séquence cible dans l’échantillon, la fluorescence augmente à chaque cycle de la réaction et est détectée par le système =
iC scier iQ ». Cette méthode validée Afnor permet la détection des salmonelles =
en 24 heures dans les produits alimentaires et de l’environnement.
7.2.2. Protocole
Préparer la suspension mère en mettant 25 g d’aliments dans 225 mL d’eau j
peptonée tamponnée (cf. première partie, chapitre 4 « Méthodes de travail en ;
microbiologie ». paragraphe 3.1.1.2.).
Incuber à 37 °C pendant 21 ± 1 heures.
Réaliser la PCR suivant la méthode indiquée par le fabricant. Les résultats sont i
obtenus moins de heures après l'enrichissement en eau peptonée tamponée.