Enterobacteriaceae (entérobactéries)
283
Couler 15 mL environ de la gélose TBX liquéfiée et ramenée de 44 à 47 °C,
homogénéiser et laisser solidifier.
Incuber à 44 ± 1 °C pendant 21 ± 3 heures, sans dépasser 24 heures.
Remarque
Si la présence d’Escherichia coli stressés est soupçonnée, incuber 4 heures à
37 ± 1 °C puis 21 ± 3 heures à 44 ± 1 °C.
► Second cas : méthode avec membrane filtrante
Elle est préconisée pour les produits pouvant contenir des bactéries sévèrement stressées par leur mode de fabrication.
Préparer des boîtes de Petri avec le milieu MMGA et avec le milieu TBX
(environ 15 mL par boîte de Petri).
Déposer aseptiquement la membrane sur la surface sèche de la gélose MMGA
en évitant d’enfermer des bulles d’air sous la membrane.
Transférer à l’aide d’une pipette stérile 1 mL de l’échantillon à analyser (produit liquide) ou de la suspension mère (autres produits) et/ou 1 mL de ses dilutions décimales au centre de la membrane.
Puis étaler l’inoculum uniformément sur toute la surface de la membrane sans
déborder ; laisser la boîte en position normale à température ambiante pendant
15 minutes environ (temps nécessaire à l’imprégnation de l’inoculum par la
gélose).
Incuber la boîte (en position retournée) à 37 ± 1 °C pendant 4 ± 1 heures.
Après ce temps de revivification des germes, transférer stérilement la membrane sur une boîte de Petri de gélose TBX et incuber à 44 ± 1 °C pendant
21 ±3 heures, sans dépasser 24 heures.
► Information pratique
Le milieu MMGA, milieu au glutamate de sodium modifié, est un milieu de
revivification (non disponible Bio-Rad) dont la composition chimique est donnée
par Joly et Reynaud (2003).
ç 7.123. Lecture et interprétation du milieu
j Les colonies d’Escherichia coli apparaissant bleues ou bleu-vert, sont 0-DI glucuronidase+
Cependant, certaines souches d’Escherichia coli (3 à 4 % environ), dont
î Escherichia coli O 157 sont p-D-glucuronidase-; d’autres souches telles que
î Escherichia coli O 157 : H7 ne se développent pas à 44 °C. Par ailleurs, des séro; vars de Salmonella et quelques espèces de Shigella possèdent également la p-D; ?'ucuronidase (moins de 1,5 %) (Bio-Rad).
Les autres colonies bactériennes sont blanches à beiges ; elles sont p-D-glucuronidase-.
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Couler 15 mL environ de la gélose TBX liquéfiée et ramenée de 44 à 47 °C,
homogénéiser et laisser solidifier.
Incuber à 44 ± 1 °C pendant 21 ± 3 heures, sans dépasser 24 heures.
Remarque
Si la présence d’Escherichia coli stressés est soupçonnée, incuber 4 heures à
37 ± 1 °C puis 21 ± 3 heures à 44 ± 1 °C.
► Second cas : méthode avec membrane filtrante
Elle est préconisée pour les produits pouvant contenir des bactéries sévèrement stressées par leur mode de fabrication.
Préparer des boîtes de Petri avec le milieu MMGA et avec le milieu TBX
(environ 15 mL par boîte de Petri).
Déposer aseptiquement la membrane sur la surface sèche de la gélose MMGA
en évitant d’enfermer des bulles d’air sous la membrane.
Transférer à l’aide d’une pipette stérile 1 mL de l’échantillon à analyser (produit liquide) ou de la suspension mère (autres produits) et/ou 1 mL de ses dilutions décimales au centre de la membrane.
Puis étaler l’inoculum uniformément sur toute la surface de la membrane sans
déborder ; laisser la boîte en position normale à température ambiante pendant
15 minutes environ (temps nécessaire à l’imprégnation de l’inoculum par la
gélose).
Incuber la boîte (en position retournée) à 37 ± 1 °C pendant 4 ± 1 heures.
Après ce temps de revivification des germes, transférer stérilement la membrane sur une boîte de Petri de gélose TBX et incuber à 44 ± 1 °C pendant
21 ±3 heures, sans dépasser 24 heures.
► Information pratique
Le milieu MMGA, milieu au glutamate de sodium modifié, est un milieu de
revivification (non disponible Bio-Rad) dont la composition chimique est donnée
par Joly et Reynaud (2003).
ç 7.123. Lecture et interprétation du milieu
j Les colonies d’Escherichia coli apparaissant bleues ou bleu-vert, sont 0-DI glucuronidase+
Cependant, certaines souches d’Escherichia coli (3 à 4 % environ), dont
î Escherichia coli O 157 sont p-D-glucuronidase-; d’autres souches telles que
î Escherichia coli O 157 : H7 ne se développent pas à 44 °C. Par ailleurs, des séro; vars de Salmonella et quelques espèces de Shigella possèdent également la p-D; ?'ucuronidase (moins de 1,5 %) (Bio-Rad).
Les autres colonies bactériennes sont blanches à beiges ; elles sont p-D-glucuronidase-.