282
Microbiologie pratique pour le laboratoire d'analyses ou de contrôle sanitaire
Elle est conforme aux normes NF ISO 16649-1 (première partie, août 2001) et
NF ISO 16649-2 (deuxième partie, juillet 2001) de microbiologie des aliments
pour le dénombrement des Escherichia coli p-glucuronidase positive. La première partie de la norme se rapporte à une technique de comptage des colonies à
44 °C au moyen de membranes et d'acide 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-P-D-glucuronique et la deuxième partie à une technique de comptage des colonies à
44 °C au moyen du même substrat chromogénique.
Elle est aussi conforme à la norme NF V 080-053 (2002) qui reprend cette
technique de comptage à 44 °C avec le même substrat en méthode de routine.
7.1.2.1. Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
► Composition chimique
La composition chimique (formule type) en g/L d’eau distillée est :
Digestat enzymatique de caséine......................................................... 20
Sels biliaires n° 3.................................................................................. 1,5
BCIG * ................................................................................................... 0,075
Agar......................................................................................................... 12
pH final 7,2 ±0,2 à 25 °C
BCIG : acide 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-|3-D-glucuronique
Stérilisation à l'autoclave à 121 °C pendant 15 minutes
Ce milieu peut être préparé à partir du milieu déshydraté suivant les recommandations du fabricant. Il est aussi disponible en flacons de 100 mL prêts a
l'emploi. Respecter les précautions d’emploi du fabricant.
► Mode d'action
Les sels biliaires inhibent les bactéries à Gram-i- ; la température d’incubation
à 44 °C renforce la sélectivité de ce milieu.
Le complexe BCIG est composé d’un sucre lié à une substance chromogène,
il est absorbé par Escherichia coli et hydrolysé en ses deux constituants par une
enzyme spécifique, la P-D-glucuronidase à 44 °C. Le sucre libéré est utilisé par
la bactérie alors que la substance chromogène s’accumule dans la cellule bactérienne et colore ainsi la colonie en bleu ou bleu-vert.
7.1.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
Préparer 1 échantillon d aliment à analyser et les dilutions décimales en Trxptone sel bioMérieux SA (cf. première partie, chapitre 4 « Méthodes de travail en .
microbiologie », paragraphe 3.1.).
► 1 rentier cas : méthode sans membrane filtrante
Elle est préconisée pour les produits contenant des bactéries stressées ou non .
Transférer à l'aide de pipettes stériles 1 mL de l’échantillon à analyser (produit liquide) ou de la suspension mère (autres produits) et/ou 1 mL de ses dilutions décimales dans des boîtes de Pétri vides stériles (deux boîtes par dilution’
Microbiologie pratique pour le laboratoire d'analyses ou de contrôle sanitaire
Elle est conforme aux normes NF ISO 16649-1 (première partie, août 2001) et
NF ISO 16649-2 (deuxième partie, juillet 2001) de microbiologie des aliments
pour le dénombrement des Escherichia coli p-glucuronidase positive. La première partie de la norme se rapporte à une technique de comptage des colonies à
44 °C au moyen de membranes et d'acide 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-P-D-glucuronique et la deuxième partie à une technique de comptage des colonies à
44 °C au moyen du même substrat chromogénique.
Elle est aussi conforme à la norme NF V 080-053 (2002) qui reprend cette
technique de comptage à 44 °C avec le même substrat en méthode de routine.
7.1.2.1. Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
► Composition chimique
La composition chimique (formule type) en g/L d’eau distillée est :
Digestat enzymatique de caséine......................................................... 20
Sels biliaires n° 3.................................................................................. 1,5
BCIG * ................................................................................................... 0,075
Agar......................................................................................................... 12
pH final 7,2 ±0,2 à 25 °C
BCIG : acide 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-|3-D-glucuronique
Stérilisation à l'autoclave à 121 °C pendant 15 minutes
Ce milieu peut être préparé à partir du milieu déshydraté suivant les recommandations du fabricant. Il est aussi disponible en flacons de 100 mL prêts a
l'emploi. Respecter les précautions d’emploi du fabricant.
► Mode d'action
Les sels biliaires inhibent les bactéries à Gram-i- ; la température d’incubation
à 44 °C renforce la sélectivité de ce milieu.
Le complexe BCIG est composé d’un sucre lié à une substance chromogène,
il est absorbé par Escherichia coli et hydrolysé en ses deux constituants par une
enzyme spécifique, la P-D-glucuronidase à 44 °C. Le sucre libéré est utilisé par
la bactérie alors que la substance chromogène s’accumule dans la cellule bactérienne et colore ainsi la colonie en bleu ou bleu-vert.
7.1.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
Préparer 1 échantillon d aliment à analyser et les dilutions décimales en Trxptone sel bioMérieux SA (cf. première partie, chapitre 4 « Méthodes de travail en .
microbiologie », paragraphe 3.1.).
► 1 rentier cas : méthode sans membrane filtrante
Elle est préconisée pour les produits contenant des bactéries stressées ou non .
Transférer à l'aide de pipettes stériles 1 mL de l’échantillon à analyser (produit liquide) ou de la suspension mère (autres produits) et/ou 1 mL de ses dilutions décimales dans des boîtes de Pétri vides stériles (deux boîtes par dilution’