Enterobacteriaceae (entérobactéries)
267
Transférer :
-0,1 mL de la culture obtenue dans un tube contenant 10 mL de bouillon Rappaport-Vassiliadis-Soja ou RVS (cf. infra, paragraphe 5.1.3.) ;
- 1 mL de la culture obtenue dans un tube contenant 10 mL de bouillon MuellerKaufmann au tétrathionate-novobiocine ou MKTTn.
Incuber le premier milieu à 41,5 ± 1 °C et le second à 37 ± 1 °C pendant
24 + 3 heures.
5.12.3. Lecture et interprétation du milieu
A partir de chaque milieu d’enrichissement, ensemencer en stries :
-deux boîtes de Pétri de gélose XLD (cf. infra, paragraphe 5.2.4.) ;
-deux boîtes de Pétri d’un autre milieu sélectif gélosé normalisé pour la
microbiologie des aliments (cf. infra, paragraphe 5.2.).
Incuber les boîtes de Pétri à 37 ± 1 °C pendant 24 ± 3 heures.
Observer les colonies typiques de Salmonella. Sélectionner cinq d'entre elles
et procéder à leur identification biochimique et/ou immunologique.
5.12.4. Contrôle de qualité du milieu
Après un enrichissement pendant 24 heures à 37 °C sur ce milieu, les souches
Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Salmonella Enteritidis ATCC 13076 et
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853b se développent, alors que les souches
Escherichia coli ATCC 25922 et Enterococcus faecalis ATCC 29212 ne se
développent pas (moins de 10 colonies pour cette dernière souche).
5.1.3. Bouillon Rappaport-Vassiliadis-Soja ou RVS bioMérieux SA
Ce bouillon d’enrichissement sélectif conçu pour la recherche des salmonelles dans
les aliments est une modification du bouillon Rappaport-Vassiliadis traditionnel.
Il est conforme à la norme NF EN ISO 6579 (2002) pour la recherche de tous
les sérotypes de salmonelles isolés dans les aliments à l’exception de Salmonella
Typhi et de Salmonella Paratyphi.
5.1.3.1. Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
L r
s ► Composition chimique
La formule théorique de ce milieu de culture en g/L d eau purifiée est :
= Peptone de soja.......................................................................................
4,5
Chlorure de sodium .............................................................................. 7,2
| Tampon phosphate : KH2PO4 + K2HPO4...........................................
1 -44
Chlorure de magnésium 6H2O............................................................ 28,4
« Oxalate de vert malachite..................................................................... 0,036
pH 5,2
Ce milieu est disponible en tubes (10 mL) prêts à l’emploi. Laisser les tubes
ævenir à température ambiante avant usage.
267
Transférer :
-0,1 mL de la culture obtenue dans un tube contenant 10 mL de bouillon Rappaport-Vassiliadis-Soja ou RVS (cf. infra, paragraphe 5.1.3.) ;
- 1 mL de la culture obtenue dans un tube contenant 10 mL de bouillon MuellerKaufmann au tétrathionate-novobiocine ou MKTTn.
Incuber le premier milieu à 41,5 ± 1 °C et le second à 37 ± 1 °C pendant
24 + 3 heures.
5.12.3. Lecture et interprétation du milieu
A partir de chaque milieu d’enrichissement, ensemencer en stries :
-deux boîtes de Pétri de gélose XLD (cf. infra, paragraphe 5.2.4.) ;
-deux boîtes de Pétri d’un autre milieu sélectif gélosé normalisé pour la
microbiologie des aliments (cf. infra, paragraphe 5.2.).
Incuber les boîtes de Pétri à 37 ± 1 °C pendant 24 ± 3 heures.
Observer les colonies typiques de Salmonella. Sélectionner cinq d'entre elles
et procéder à leur identification biochimique et/ou immunologique.
5.12.4. Contrôle de qualité du milieu
Après un enrichissement pendant 24 heures à 37 °C sur ce milieu, les souches
Salmonella Typhimurium ATCC 14028, Salmonella Enteritidis ATCC 13076 et
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853b se développent, alors que les souches
Escherichia coli ATCC 25922 et Enterococcus faecalis ATCC 29212 ne se
développent pas (moins de 10 colonies pour cette dernière souche).
5.1.3. Bouillon Rappaport-Vassiliadis-Soja ou RVS bioMérieux SA
Ce bouillon d’enrichissement sélectif conçu pour la recherche des salmonelles dans
les aliments est une modification du bouillon Rappaport-Vassiliadis traditionnel.
Il est conforme à la norme NF EN ISO 6579 (2002) pour la recherche de tous
les sérotypes de salmonelles isolés dans les aliments à l’exception de Salmonella
Typhi et de Salmonella Paratyphi.
5.1.3.1. Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
L r
s ► Composition chimique
La formule théorique de ce milieu de culture en g/L d eau purifiée est :
= Peptone de soja.......................................................................................
4,5
Chlorure de sodium .............................................................................. 7,2
| Tampon phosphate : KH2PO4 + K2HPO4...........................................
1 -44
Chlorure de magnésium 6H2O............................................................ 28,4
« Oxalate de vert malachite..................................................................... 0,036
pH 5,2
Ce milieu est disponible en tubes (10 mL) prêts à l’emploi. Laisser les tubes
ævenir à température ambiante avant usage.