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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
- un enrichissement dans deux milieux sélectifs liquides avec le bouillon de
Rappaport-Vassiliadis-Soja (RVS) (c/. infra, paragraphe 5.1.3.) et le bouillon
Mueller-Kaufmann au tétrathionate-novobiocine (MKTTn) ;
- un isolement sur deux milieux sélectifs solides : le premier est imposé avec
la gélose xylose lysine désoxycholate (XLD) (cf. infra, paragraphe 5.2.4.), le
deuxième milieu sélectif est laissé au choix du laboratoire (cf infra, paragraphes
5.2.2., 5.2.3.).
5.1.2.1. Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
► Composition chimique
La formule type du milieu de culture complet en g/L d’eau distillée est :
Digestat enzymatique d’extrait de viande............................................ 4,23
Digestat enzymatique de caséine........................................................ 8,45
Chlorure de sodium .............................................................................. 2,54
Carbonate de calcium............................................................................ 38,04
Thiosulfate de sodium (anhydre)*........................................................ 30,27
Sels biliaires.......................................................................................... 4,75
Vert brillant .......................................................................................... 9,5 mg
lodine..................................................................................................... 4
lodure de potassium.............................................................................. 5
Novobiocine.......................................................................................... 0,05
pH final 8 ± 0,2 à 25° C
équivalent à 47,02 g de thiosulfate de sodium pentahydraté
C e milieu est disponible en tubes de 10 mL prêts à l’emploi. Il peut aussi être
préparé, à partir du milieu de base déshydraté dont la composition chimique est
semblable à celle du milieu complet, avec ajout des additifs suivant les indications du fabricant.
► Mode d'action
Le tétrathionate de sodium résulte de la réaction entre le complexe iodo-ioduré
(iodine et iodure de potassium) et le thiosulfate de potassium. Il est inhibiteur de
la plupart des bactéries à Gram- autres que Salmonella et Proteus, qui ne possèdent pas une tétrathionate-réductase.
La bile de bœuf et le vert brillant sont des inhibiteurs de bactéries Gram+.
Le carbonate de calcium neutralise les produits acides libérés lors de la réduc- ;
tion du tétrathionate par les Salmonella et les Proteus.
La novobiocine est un antibiotique à spectre étroit permettant d’inhiber des
cocci Gram+ (Staphylococcus...) et Gram-, des bacilles Gram+...
5.1.2 2. Ensemencement et incubation du milieu
A partir de la suspension mère de l’aliment, en eau peptonée tamponnée, préparer un pré-enrichissement dans le même milieu de culture selon le mode opératoire de la nonne. Incuber à 37 ± 1 °C pendant 18 ± 2 heures.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
- un enrichissement dans deux milieux sélectifs liquides avec le bouillon de
Rappaport-Vassiliadis-Soja (RVS) (c/. infra, paragraphe 5.1.3.) et le bouillon
Mueller-Kaufmann au tétrathionate-novobiocine (MKTTn) ;
- un isolement sur deux milieux sélectifs solides : le premier est imposé avec
la gélose xylose lysine désoxycholate (XLD) (cf. infra, paragraphe 5.2.4.), le
deuxième milieu sélectif est laissé au choix du laboratoire (cf infra, paragraphes
5.2.2., 5.2.3.).
5.1.2.1. Composition chimique et mode d’action du milieu de culture
► Composition chimique
La formule type du milieu de culture complet en g/L d’eau distillée est :
Digestat enzymatique d’extrait de viande............................................ 4,23
Digestat enzymatique de caséine........................................................ 8,45
Chlorure de sodium .............................................................................. 2,54
Carbonate de calcium............................................................................ 38,04
Thiosulfate de sodium (anhydre)*........................................................ 30,27
Sels biliaires.......................................................................................... 4,75
Vert brillant .......................................................................................... 9,5 mg
lodine..................................................................................................... 4
lodure de potassium.............................................................................. 5
Novobiocine.......................................................................................... 0,05
pH final 8 ± 0,2 à 25° C
équivalent à 47,02 g de thiosulfate de sodium pentahydraté
C e milieu est disponible en tubes de 10 mL prêts à l’emploi. Il peut aussi être
préparé, à partir du milieu de base déshydraté dont la composition chimique est
semblable à celle du milieu complet, avec ajout des additifs suivant les indications du fabricant.
► Mode d'action
Le tétrathionate de sodium résulte de la réaction entre le complexe iodo-ioduré
(iodine et iodure de potassium) et le thiosulfate de potassium. Il est inhibiteur de
la plupart des bactéries à Gram- autres que Salmonella et Proteus, qui ne possèdent pas une tétrathionate-réductase.
La bile de bœuf et le vert brillant sont des inhibiteurs de bactéries Gram+.
Le carbonate de calcium neutralise les produits acides libérés lors de la réduc- ;
tion du tétrathionate par les Salmonella et les Proteus.
La novobiocine est un antibiotique à spectre étroit permettant d’inhiber des
cocci Gram+ (Staphylococcus...) et Gram-, des bacilles Gram+...
5.1.2 2. Ensemencement et incubation du milieu
A partir de la suspension mère de l’aliment, en eau peptonée tamponnée, préparer un pré-enrichissement dans le même milieu de culture selon le mode opératoire de la nonne. Incuber à 37 ± 1 °C pendant 18 ± 2 heures.