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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
4.32.4. Lecture du milieu et dénombrement des colonies
Les colonies noires avec un halo noir sont présomptives de Clostridium perfringens.
Dénombrer les colonies typiques dans les boîtes contenant au maximum
150 colonies et en sélectionner cinq en vue de leur confirmation biochimique.
4.32.5. Confirmation de Clostridium perfringens
Pour cela, ensemencer tout d’abord chaque colonie dans un tube de bouillon
thioglycolate avec résazurine (cf. infra, paragraphe 4.4.). Incuber à 37 °C pendant 18 à 24 heures en anaérobiose.
Prélever 5 gouttes de chaque culture et les ensemencer dans un tube de
bouillon lactose-sulfite avec cloche de Durham. Bien revisser le tube et incuber
à 46 °C pendant 18 à 24 heures dans un bain-marie.
Tout tube présentant un précipité noir de sulfure de fer et un volume de gaz
supérieur à 1/4 du volume de la cloche confirme la présence de Cl. perfringens.
En cas de doute sur le volume de gaz, recommencer ce contrôle.
Exprimer le nombre de Clostridium perfringens par g ou par mL d’aliment en
se référant, pour le calcul, à la norme ISO 7218, « Microbiologie des alimentsRègles générales pour les examens microbiologiques ».
► Autre technique
Pour confirmer les colonies de Clostridium perfringens, une deuxième
méthode utilise un milieu nitrate mobilité et un milieu lactosé à la gélatine
(cf. norme N F EN ISO 7937).
4.4.
En Pharmacopée
4.4.1. Bactéries anaérobies et Clostridium perfringens
Pour la réalisation des tests de stérilité des produits pharmaceutiques, le
bouillon thioglycolate avec résazurine bioMérieux" SA peut être utilise cari
permet la culture des bactéries anaérobies, mais aussi celle des bactéries aero
bies. En effet, il est conforme aux Pharmacopées européenne 5, américaine ?
DSP 27 et japonaise 14 (cf. annexe générale 7 « Milieux de culture utilises en
Pharmacopée »).
Il est utilisé en temps que milieu de repiquage dans la recherche de Clostn ?
dium perfringens (cf. supra, paragraphe 4.3.2.5.).
Il est aussi recommandé pour l'enrichissement non sélectif des germes non
exigeants à partir de prélèvements biologiques en bactériologie médicale.
Le milieu thio-clair bioMérieux" SA (bouillon thioglycolate avec résazurine) a !
une composition chimique similaire au milieu ci-dessus, la peptone de caserne ;
(box in) étant remplacée par un hydrolysat pancréatique de caséine (bovin). Ce m> æn ;
est également recommandé pour les tests de contrôle de stérilité en Pharmacopée.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
4.32.4. Lecture du milieu et dénombrement des colonies
Les colonies noires avec un halo noir sont présomptives de Clostridium perfringens.
Dénombrer les colonies typiques dans les boîtes contenant au maximum
150 colonies et en sélectionner cinq en vue de leur confirmation biochimique.
4.32.5. Confirmation de Clostridium perfringens
Pour cela, ensemencer tout d’abord chaque colonie dans un tube de bouillon
thioglycolate avec résazurine (cf. infra, paragraphe 4.4.). Incuber à 37 °C pendant 18 à 24 heures en anaérobiose.
Prélever 5 gouttes de chaque culture et les ensemencer dans un tube de
bouillon lactose-sulfite avec cloche de Durham. Bien revisser le tube et incuber
à 46 °C pendant 18 à 24 heures dans un bain-marie.
Tout tube présentant un précipité noir de sulfure de fer et un volume de gaz
supérieur à 1/4 du volume de la cloche confirme la présence de Cl. perfringens.
En cas de doute sur le volume de gaz, recommencer ce contrôle.
Exprimer le nombre de Clostridium perfringens par g ou par mL d’aliment en
se référant, pour le calcul, à la norme ISO 7218, « Microbiologie des alimentsRègles générales pour les examens microbiologiques ».
► Autre technique
Pour confirmer les colonies de Clostridium perfringens, une deuxième
méthode utilise un milieu nitrate mobilité et un milieu lactosé à la gélatine
(cf. norme N F EN ISO 7937).
4.4.
En Pharmacopée
4.4.1. Bactéries anaérobies et Clostridium perfringens
Pour la réalisation des tests de stérilité des produits pharmaceutiques, le
bouillon thioglycolate avec résazurine bioMérieux" SA peut être utilise cari
permet la culture des bactéries anaérobies, mais aussi celle des bactéries aero
bies. En effet, il est conforme aux Pharmacopées européenne 5, américaine ?
DSP 27 et japonaise 14 (cf. annexe générale 7 « Milieux de culture utilises en
Pharmacopée »).
Il est utilisé en temps que milieu de repiquage dans la recherche de Clostn ?
dium perfringens (cf. supra, paragraphe 4.3.2.5.).
Il est aussi recommandé pour l'enrichissement non sélectif des germes non
exigeants à partir de prélèvements biologiques en bactériologie médicale.
Le milieu thio-clair bioMérieux" SA (bouillon thioglycolate avec résazurine) a !
une composition chimique similaire au milieu ci-dessus, la peptone de caserne ;
(box in) étant remplacée par un hydrolysat pancréatique de caséine (bovin). Ce m> æn ;
est également recommandé pour les tests de contrôle de stérilité en Pharmacopée.