Clostridium
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43.2.2. Second milieu de culture
Le bouillon lactose-sulfite Bio-Rad est utilisé pour la recherche et la confirmation des spores de Clostridium perfringens dans les produits alimentaires après
incubation à 46 °C.
En microbiologie des aliments, il est conforme aux normes NF V 59-107
(1984) et V 08-056 (1994). En Pharmacopée européenne, il correspond au milieu
liquide R utilisé pour le contrôle microbiologique des produits non stériles
(cf. annexe générale 7 « Milieux de culture utilisés en Pharmacopée »).
► Composition chimique du milieu
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture en g/L d’eau
distillée est :
Peptone...................................................................................................
5
Extrait de levure....................................................................................
2,5
Chlorure de sodium ..............................................................................
2,5
Lactose................................................................................................... 10
Chlorhydrate de cystéine....................................................................... 300 mg
pH final 7,1 ±0,1
Stérilisation à l’autoclave : 121 ± 1 °C pendant 15 minutes
À partir du milieu déshydraté, préparer, suivant le mode opératoire du fabricant, des tubes de bouillon avec cloches de Durham (à raison de 8 mL par tube)
pour une utilisation du bouillon comme milieu de confirmation pour Clostridium
perfringens.
Au moment de l’emploi, régénérer les tubes au bain-marie bouillant pendant
5 minutes, puis ajouter dans chaque tube 0,5 mL d’une solution stérile de métabisulfite de sodium à 1,2 % (ou de sulfite de sodium) et 0,5 mL d’une solution
stérile de citrate de fer III ammoniacal à 1 %.
► Mode d’action du milieu
Le lactose est fermenté par Cl. perfringens avec production d'acides et de gaz
qui sont recueillis dans la cloche de Durham.
Le métabisulfite de sodium (ou le sulfite de sodium) et le citrate de ter 111
| ammoniacal ont le même rôle que dans le milieu précédent. Ici, le sulfure de ter
§ noir se dépose dans le fond du tube.
| 43.2.3. Protocole de recherche dans les aliments et incubation
Procéder comme pour la recherche des bactéries anaérobies sulfitoréductrices
I(cf. supra, paragraphe 4.3.1.2.).
Après solidification de la gélose TSC dans les boîtes de Pétri, couler une
, deuxième couche de la même gélose (10 mL).
j
Laisser solidifier, puis incuber les boîtes de Pétri à 37 G pendant
: 20 + 2 heures en jarre anaérobie (cf. première partie, chapitre 2 « Matériel prinC|pal du laboratoire de microbiologie », paragraphe 1.2.4.).
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43.2.2. Second milieu de culture
Le bouillon lactose-sulfite Bio-Rad est utilisé pour la recherche et la confirmation des spores de Clostridium perfringens dans les produits alimentaires après
incubation à 46 °C.
En microbiologie des aliments, il est conforme aux normes NF V 59-107
(1984) et V 08-056 (1994). En Pharmacopée européenne, il correspond au milieu
liquide R utilisé pour le contrôle microbiologique des produits non stériles
(cf. annexe générale 7 « Milieux de culture utilisés en Pharmacopée »).
► Composition chimique du milieu
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture en g/L d’eau
distillée est :
Peptone...................................................................................................
5
Extrait de levure....................................................................................
2,5
Chlorure de sodium ..............................................................................
2,5
Lactose................................................................................................... 10
Chlorhydrate de cystéine....................................................................... 300 mg
pH final 7,1 ±0,1
Stérilisation à l’autoclave : 121 ± 1 °C pendant 15 minutes
À partir du milieu déshydraté, préparer, suivant le mode opératoire du fabricant, des tubes de bouillon avec cloches de Durham (à raison de 8 mL par tube)
pour une utilisation du bouillon comme milieu de confirmation pour Clostridium
perfringens.
Au moment de l’emploi, régénérer les tubes au bain-marie bouillant pendant
5 minutes, puis ajouter dans chaque tube 0,5 mL d’une solution stérile de métabisulfite de sodium à 1,2 % (ou de sulfite de sodium) et 0,5 mL d’une solution
stérile de citrate de fer III ammoniacal à 1 %.
► Mode d’action du milieu
Le lactose est fermenté par Cl. perfringens avec production d'acides et de gaz
qui sont recueillis dans la cloche de Durham.
Le métabisulfite de sodium (ou le sulfite de sodium) et le citrate de ter 111
| ammoniacal ont le même rôle que dans le milieu précédent. Ici, le sulfure de ter
§ noir se dépose dans le fond du tube.
| 43.2.3. Protocole de recherche dans les aliments et incubation
Procéder comme pour la recherche des bactéries anaérobies sulfitoréductrices
I(cf. supra, paragraphe 4.3.1.2.).
Après solidification de la gélose TSC dans les boîtes de Pétri, couler une
, deuxième couche de la même gélose (10 mL).
j
Laisser solidifier, puis incuber les boîtes de Pétri à 37 G pendant
: 20 + 2 heures en jarre anaérobie (cf. première partie, chapitre 2 « Matériel prinC|pal du laboratoire de microbiologie », paragraphe 1.2.4.).