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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
4.2.1. Enrichissement sur bouillon de Preston
Le bouillon de Preston AES Laboratoire est un milieu sélectif destiné à l’enrichissement des Campylohacter avec des prélèvements suspectés d’être fortement
contaminés et/ou de contenir de petits nombres de cellules viables.
4.2.1.1. Mode de préparation, composition chimique et mode d’action du milieu
de culture
► Mode de préparation
Ce milieu est préparé à partir d’un bouillon nutritif à 2,5 % AES Laboratoire.
Pour cela, mettre 12,5 g de poudre dans 475 mL d’eau distillée, dissoudre et stériliser à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C.
Ramener le milieu à 42 ± 1 °C, ajouter aseptiquement :
- 25 mL de sang de cheval lysé stérile ;
- une ampoule de supplément sélectif de Preston, reconstitué à l’aide de 2mL
d’une solution stérile d’acétone à 50 % dans de l’eau distillée ;
- une ampoule de supplément de croissance FBP, reconstitué à l’aide de 5 mL
d’eau distillée stérile ;
- répartir aseptiquement 5 mL dans des tubes ou des flacons stériles à col à
vis.
► Composition chimique du supplément sélectif de Preston
Formule du supplément pour 5 mL d’acétone/eau distillée à 50 %
Actidione.................................................................................................
50 mg
Sulfate de polymyxine B....................................................................... 2 500II
Rifampicine............................................................................................
5mg
Lactate de triméthoprime.....................................................................
5 mg
► Mode d'action
Le rôle des antibiotiques du supplément sélectif est précisé dans les tableaux
23A à E de la première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du matériel
et des milieux de culture ».
Le supplément de croissance FBP (sulfate de fer, métabisulfite de sodium,
pyruvate de sodium) évite 1 incubation et l’atmosphère microaérophile.
4.2.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Introduire 25 g d aliment dans 225 mL de bouillon de Preston.
► Avec enrichissement
1 enrichissement permet une revivification des germes stressés.
Incuber la suspension préparée à 42 °C en aérobiose pendant 18 à 24 heures.
Effectuer des subcultures pour l’isolement des Campylohacter en ensemençant :
soit une gélose de Karmali (cf. infra, paragraphe 4.2.2.2.) et une gélose de
Butzler (cf infra, paragraphe 4.2.2.3) en boîtes de Pétri ;
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
4.2.1. Enrichissement sur bouillon de Preston
Le bouillon de Preston AES Laboratoire est un milieu sélectif destiné à l’enrichissement des Campylohacter avec des prélèvements suspectés d’être fortement
contaminés et/ou de contenir de petits nombres de cellules viables.
4.2.1.1. Mode de préparation, composition chimique et mode d’action du milieu
de culture
► Mode de préparation
Ce milieu est préparé à partir d’un bouillon nutritif à 2,5 % AES Laboratoire.
Pour cela, mettre 12,5 g de poudre dans 475 mL d’eau distillée, dissoudre et stériliser à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C.
Ramener le milieu à 42 ± 1 °C, ajouter aseptiquement :
- 25 mL de sang de cheval lysé stérile ;
- une ampoule de supplément sélectif de Preston, reconstitué à l’aide de 2mL
d’une solution stérile d’acétone à 50 % dans de l’eau distillée ;
- une ampoule de supplément de croissance FBP, reconstitué à l’aide de 5 mL
d’eau distillée stérile ;
- répartir aseptiquement 5 mL dans des tubes ou des flacons stériles à col à
vis.
► Composition chimique du supplément sélectif de Preston
Formule du supplément pour 5 mL d’acétone/eau distillée à 50 %
Actidione.................................................................................................
50 mg
Sulfate de polymyxine B....................................................................... 2 500II
Rifampicine............................................................................................
5mg
Lactate de triméthoprime.....................................................................
5 mg
► Mode d'action
Le rôle des antibiotiques du supplément sélectif est précisé dans les tableaux
23A à E de la première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du matériel
et des milieux de culture ».
Le supplément de croissance FBP (sulfate de fer, métabisulfite de sodium,
pyruvate de sodium) évite 1 incubation et l’atmosphère microaérophile.
4.2.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Introduire 25 g d aliment dans 225 mL de bouillon de Preston.
► Avec enrichissement
1 enrichissement permet une revivification des germes stressés.
Incuber la suspension préparée à 42 °C en aérobiose pendant 18 à 24 heures.
Effectuer des subcultures pour l’isolement des Campylohacter en ensemençant :
soit une gélose de Karmali (cf. infra, paragraphe 4.2.2.2.) et une gélose de
Butzler (cf infra, paragraphe 4.2.2.3) en boîtes de Pétri ;