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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Dissoudre 20 g/L de poudre, ajouter 10 mL de tributyrine neutre par litre,
mélanger et stériliser à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C. Ramener le
milieu à 50 °C environ, couler les boîtes de Pétri en agitant fréquemment pour
émulsionner la tributyrine et laisser solidifier. Le milieu doit être uniformément
trouble pour être efficace et avoir un pH de 7,5 ±0,1.
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer avec la souche à tester par étalement à la surface du milieu ou par
incorporation dans le milieu en fonction de l’objectif recherché.
Ainsi, pour la numération de germes lipolytiques, mettre 1 mL de la dilution
de l'échantillon à analyser dans une boîte de Pétri vide stérile, ajouter le milieu
maintenu en surfusion, bien homogénéiser et laisser solidifier.
Incuber en général à 28 °C pendant plus de 72 heures ou à la température optimale du germe étudié.
► Lecture et interprétation du milieu
L'hydrolyse de la tributyrine en glycérol et acide butyrique en présence de la
lipase se traduit par un halo clair entourant les colonies lipolytiques dans un
milieu resté trouble par ailleurs. Le test est alors lipase+.
► Contrôle de qualité du milieu
Les souches de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus
aureus ATCC 25923 et Bacillus subtilis ATCC 6633 ont une bonne croissance
sur ce milieu et elles produisent des halos clairs autour des colonies.
Les souches d’Escherichia coli ATCC 25922 et Salmonella Typhimurium ATCC
14028 se développent sur ce milieu mais elles ne produisent pas de halos clairs.
4.3.
Lécithinases
Elles hydrolysent la lécithine, apportée en routine dans les milieux de culture
par une émulsion de jaune d'œuf.
Elles produisent une opacification par rupture de l’émulsion ; leur recherche
est utile pour I identification des genres Pseudomonas, Bacillus et Clostridium et
pour la caractérisation des colonies de Staphylococcus aureus sur la gélose de
Baird-Parker (cf. deuxième partie, chapitre 9 « Staphylococcus, Micrococcus et
CK-Micrococcus », paragraphe 5.2.1.).
Le jaune d œuf. substrat complexe est composé de lécithine, de triglycérides
et d une lipoprotéine. 11 permet donc de rechercher trois enzymes : la lécithinase.
la lipase et les lipoprotéinases.
La lécithinase est recherchée sur une gélose au jaune d’œuf coulée en boîte de
Pétri (cf. préparation première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du
matériel et des milieux de culture », paragraphe 2.4.1.2.).
Ensemencer en points avec la ou les souches à étudier.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Dissoudre 20 g/L de poudre, ajouter 10 mL de tributyrine neutre par litre,
mélanger et stériliser à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C. Ramener le
milieu à 50 °C environ, couler les boîtes de Pétri en agitant fréquemment pour
émulsionner la tributyrine et laisser solidifier. Le milieu doit être uniformément
trouble pour être efficace et avoir un pH de 7,5 ±0,1.
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer avec la souche à tester par étalement à la surface du milieu ou par
incorporation dans le milieu en fonction de l’objectif recherché.
Ainsi, pour la numération de germes lipolytiques, mettre 1 mL de la dilution
de l'échantillon à analyser dans une boîte de Pétri vide stérile, ajouter le milieu
maintenu en surfusion, bien homogénéiser et laisser solidifier.
Incuber en général à 28 °C pendant plus de 72 heures ou à la température optimale du germe étudié.
► Lecture et interprétation du milieu
L'hydrolyse de la tributyrine en glycérol et acide butyrique en présence de la
lipase se traduit par un halo clair entourant les colonies lipolytiques dans un
milieu resté trouble par ailleurs. Le test est alors lipase+.
► Contrôle de qualité du milieu
Les souches de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus
aureus ATCC 25923 et Bacillus subtilis ATCC 6633 ont une bonne croissance
sur ce milieu et elles produisent des halos clairs autour des colonies.
Les souches d’Escherichia coli ATCC 25922 et Salmonella Typhimurium ATCC
14028 se développent sur ce milieu mais elles ne produisent pas de halos clairs.
4.3.
Lécithinases
Elles hydrolysent la lécithine, apportée en routine dans les milieux de culture
par une émulsion de jaune d'œuf.
Elles produisent une opacification par rupture de l’émulsion ; leur recherche
est utile pour I identification des genres Pseudomonas, Bacillus et Clostridium et
pour la caractérisation des colonies de Staphylococcus aureus sur la gélose de
Baird-Parker (cf. deuxième partie, chapitre 9 « Staphylococcus, Micrococcus et
CK-Micrococcus », paragraphe 5.2.1.).
Le jaune d œuf. substrat complexe est composé de lécithine, de triglycérides
et d une lipoprotéine. 11 permet donc de rechercher trois enzymes : la lécithinase.
la lipase et les lipoprotéinases.
La lécithinase est recherchée sur une gélose au jaune d’œuf coulée en boîte de
Pétri (cf. préparation première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du
matériel et des milieux de culture », paragraphe 2.4.1.2.).
Ensemencer en points avec la ou les souches à étudier.