Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne
171
Le tween 80 est un substrat également utilisé pour la mise en évidence d'une
tween 80-estérase chez certaines bactéries (Proteus, Serratia, Pseudomonas...).
Il est présent dans le milieu de Sierra au Tween 80 (1956) qui n'est pas utilisé en
pratique courante.
4.1.2. Milieu de Sierra au Tween 80
La composition chimique de ce milieu de culture en g/L d’eau distillée est :
Peptone.................................................................................................... 10
Chlorure de sodium................................................................................
5
CaCl2........................................................................................................ 0,1
Gélose...................................................................................................... 15
Stérilisation à l’autoclave : 30 minutes à 120 °C
Après autoclavage, ajouter 100 mL d’une solution aqueuse à 10 % de Tween
80 à 900 mL de milieu gélosé ; puis répartir en boîtes de Pétri, laisser solidifier
et sécher.
Ensemencer des boîtes de Pétri de ce milieu en points avec les souches à étudier.
Incuber de 22 à 25 °C pendant 24 à 48 heures.
► Lecture et interprétation
L'apparition d’un halo opaque autour des colonies traduit la présence la présence d’une estérase : test estérase+.
Le calcium forme des cristaux insolubles avec les acides gras libérés par l'activité estérasique sur le tween 80.
4.2.
Lipases
Les lipases ont une action sur les triglycérides, qui se traduit par une opacité
floue due aux cristaux d’acides gras autour des colonies.
Ces enzymes sont présentes chez les Staphylococcus. Pseudomonas, Clostridium... mais elles sont surtout recherchées pour dénombrer les germes lipolytiques dans le beurre et dans d’autres produits.
=
Le triglycéride employé est en général la tributyrine ou tributyrate de glycérol
| (Merck). Le milieu Tributyrine Agar base VWR™ International (Merck) permet
» de dénombrer les germes lipolytiques, mais aussi de taire la recherche de I actiI vité des lipases.
c ► Composition chimique du milieu de culture
|
La composition chimique type de ce milieu en g/L d'eau distillée est :
s Peptone de viande.................................................................................... 2.5
5 Peptone de caséine.................................................................................
2,5
? Extrait de levure......................................................................................
3
i Agar-agar................................................................................................. 12
pH 7,5 ±0,1
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Le tween 80 est un substrat également utilisé pour la mise en évidence d'une
tween 80-estérase chez certaines bactéries (Proteus, Serratia, Pseudomonas...).
Il est présent dans le milieu de Sierra au Tween 80 (1956) qui n'est pas utilisé en
pratique courante.
4.1.2. Milieu de Sierra au Tween 80
La composition chimique de ce milieu de culture en g/L d’eau distillée est :
Peptone.................................................................................................... 10
Chlorure de sodium................................................................................
5
CaCl2........................................................................................................ 0,1
Gélose...................................................................................................... 15
Stérilisation à l’autoclave : 30 minutes à 120 °C
Après autoclavage, ajouter 100 mL d’une solution aqueuse à 10 % de Tween
80 à 900 mL de milieu gélosé ; puis répartir en boîtes de Pétri, laisser solidifier
et sécher.
Ensemencer des boîtes de Pétri de ce milieu en points avec les souches à étudier.
Incuber de 22 à 25 °C pendant 24 à 48 heures.
► Lecture et interprétation
L'apparition d’un halo opaque autour des colonies traduit la présence la présence d’une estérase : test estérase+.
Le calcium forme des cristaux insolubles avec les acides gras libérés par l'activité estérasique sur le tween 80.
4.2.
Lipases
Les lipases ont une action sur les triglycérides, qui se traduit par une opacité
floue due aux cristaux d’acides gras autour des colonies.
Ces enzymes sont présentes chez les Staphylococcus. Pseudomonas, Clostridium... mais elles sont surtout recherchées pour dénombrer les germes lipolytiques dans le beurre et dans d’autres produits.
=
Le triglycéride employé est en général la tributyrine ou tributyrate de glycérol
| (Merck). Le milieu Tributyrine Agar base VWR™ International (Merck) permet
» de dénombrer les germes lipolytiques, mais aussi de taire la recherche de I actiI vité des lipases.
c ► Composition chimique du milieu de culture
|
La composition chimique type de ce milieu en g/L d'eau distillée est :
s Peptone de viande.................................................................................... 2.5
5 Peptone de caséine.................................................................................
2,5
? Extrait de levure......................................................................................
3
i Agar-agar................................................................................................. 12
pH 7,5 ±0,1